Question

9．在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．图为获得抗虫棉的技术流程．请据图回答：
（1）A过程需要的酶有：限制性核酸内切酶和DNA连接酶
（2）将目的基因导入植物体细胞除了上述农杆菌转化法之外，还可用花粉管通道法（任填一种）；可用抗原-抗体技术检测转基抗虫棉是否成功表达出Bt毒蛋白；除抗虫基因外，基因表达载体中还必须包含的部分是启动子、终止子、标记基因（至少写出两点）．
（3）B选择培养过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入卡那霉素．
（4）由外植体培养为转基因植株的D、E过程分别为脱分化、再分化该过程的理论基础是细胞的全能性．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：首先采用基因工程技术将抗虫基因导入离体棉花叶片组织，其过程为：获取目的基因（抗虫基因）→构建基因表达载体→将目的基因导入农杆菌→用含有卡那霉素的选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌→利用农杆菌转化法将目的基因导入离体棉花叶片组织细胞．
其次采用植物组织培养技术，将导入抗虫基因的细胞培养成转基因抗虫植株，其过程主要包括脱分化和再分化两个步骤．

解答 解：（1）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．
（2）将目的基因导入植物体细胞除了上述农杆菌转化法之外，还可用花粉管通道法、基因枪法；可用抗原-抗体技术检测转基抗虫棉是否成功表达出Bt毒蛋白；除抗虫基因外，基因表达载体中还必须包含的部分是启动子、终止子、标记基因．
（3）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基筛选含有抗虫基因的再生植株．
（4）根据植物组织培养过程可知，图中D表示脱分化，E表示再分化，该过程的理论基础是细胞的全能性．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶和DNA连接酶
（2）花粉管通道     抗原-抗体     启动子、终止子、标记基因
（3）卡那霉素
（4）脱分化、再分化    细胞的全能性

点评 本题结合转基因抗虫植株的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的名称，能结合图中信息准确答题．