Question

9．降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等．人的降钙素活性很低，半衰期较短．某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如图．
在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象．分析回答下列问题：
（1）Klenow酶是一种DNA聚合酶，合成的双链DNA有126个碱基对．
（2）获得的双链DNA经EcoRⅠ（识别序列和切割位点-G↓AATTC-）和BamHⅠ（识别序列和切割位点-G↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证．
①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少，将目的基因导入此种受体细胞，需将其处理成感受态（状态）．
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是保证目的基因和载体的定向连接（或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接）
③要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含标记基因．
（3）经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是合成的核苷酸单链仍较长，产生缺失碱基的现象．
（4）上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是蛋白质工程．

Answer 1

分析 分析题图：图示是从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA．同时，在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象．

解答 解：（1）图示过程是以DNA一条链为模板，利用4种游离的脱氧核糖核苷酸为原料来合成双链DNA，此过程所用的酶是DNA聚合酶．合成的双链DNA含有的碱基对有（72-18）×2+18=126个碱基对．
（2）①大肠杆菌繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少，因此它是基因工程理想的受体细胞．将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即用钙离子处理微生物细胞，使之成为易于吸收周围环化中DNA分子的感受态．
②限制酶具有特异性，一种限制酶只识别一定的脱氧核苷酸序列，切割特定的位点．为了防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接或保证目的基因和载体定向连接，将获得的双链DNA用EcoRI和BamHI进行双酶切．
③重组质粒中含有标记基因，标记基因可以鉴别受体细胞中是否含有目的基因．
（3）由图可知，在合成DNA双链时，如果合成的核苷酸单链较长，容易发生缺失碱基的现象，这样可能会引起最初获得的多个重组质粒均未发现完全正确的基因序列．
（4）制备该新型降钙素时，先从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，之后改造DNA分子，最后生成新型降钙素，这是蛋白质工程的具体过程．
故答案为：
（1）DNA聚合　126
（2）①繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少　  感受态
②保证目的基因和载体的定向连接（或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接）
③标记基因
（3）合成的核苷酸单链仍较长，产生缺失碱基的现象
（4）蛋白质工程

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中信息准确答题．