Question

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G ↓ GATCC、↓GATC、CCC ↓GGG。 请回答下列问题：

（1）若用限制酶Sma I完全切割图1中DNA片段，其产物长度为____________________。

（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过______________技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加_________的培养基

进行培养，然后将生长的菌接种到只含____________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

（4）假设用BamH I切割DNA获取目的基因，用Mbo I切割质粒，然后形成重组质粒， 若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BajnH I ? ___________。为什么？______________________。

Answer 1