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    5．如表是几种限制酶识別序列及其切割位点，图1、图2标注相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：
    限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ
    识别序列及切割位点

    （1）质粒作为基因工程的载体，除了图1中所示的结构条件外，还需要具备终止子、复制原点．用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶切割．若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
    （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素．
    （3）为了在体外扩增目的基因，可采用聚合酶链式反应，该反应体系需要模板、缓冲液、引物、dNTP和Taq酶．为获得图2中的目的基因，所用的引物不会是引物乙，引物在退火阶段，与DNA模板按碱基互补配对原则结合．

    分析 解答本题的关键在于理解重组质粒中标记基因的作用．选择限制酶需注意插入目的基因时不能破坏标记基因．PCR扩增基因时，两种引物结合的部位相反，延伸的方向相反．限制酶具有特异性，不同的限制酶识别不同的序列，判断某种限制酶能否切割片断，应该据该片段中是否含有限制酶的识别序列．
    根据题意和图示分析可知：在质粒上存在BamH I、BclⅠ、BamH I和HindⅢ等四个酶切位点，其中BamH I的切割位点在两个抗性基因上都有，而抗性基因为载体的标记基因，因此不可用该酶切割．在目的基因上，BclⅠ、BamH I、HindⅢ和Sau3AⅠ四种酶也存在酶切位点．

    解答 解：（1）质粒作为基因工程的载体，需要具有启动子、终止子、标记基因、复制原点等条件，图1中具有启动子和标记基因．选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
    （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．
    （3）为了在体外扩增目的基因，可采用聚合酶链式反应，该反应体系需要模板、缓冲液、引物、dNTP和Taq酶．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．引物在退火阶段，与DNA模板按碱基互补配对原则结合．
    故答案为：
    （1）终止子、复制原点     BclⅠ和HindⅢ7
    （2）四环素
    （3）聚合酶链式     Taq酶     引物乙     碱基互补配对

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲应用和理解层次的考查．

    练习册系列答案
    年级 高中课程 年级 初中课程
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