Question

【题目】回答与植物克隆和动物克隆有关的问题：

研究人员欲利用抗虫基因，通过基因工程培育抗虫植物。图1和图2分别表示了抗虫基因和农杆菌Ti质粒的限制性核酸内切酶识别位点和抗生素抗性基因（PstⅠ、SmaⅠ、AluⅠ表示限制性核酸内切酶切割位点；amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因）

请回答：

（1）为获得大量抗虫基因，且保证形成重组质粒时，目的基因以唯一方向接入，可选用______（填限制性核酸内切酶的种类）分别切割目的基因和Ti质粒，再用DNA连接酶连接，形成重组DNA分子，再与经过______处理的______（A．有amp和tet B．有amp，无tet C．无amp，有tet D．无amp和tet）的农杆菌液混合，使重组DNA进入农杆菌，再利用农杆菌将目的基因导入植物细胞并整合到细胞DNA中。

（2）抗虫基因亦可通过______方法导入植物细胞，抗虫基因进入细胞后，可利用______整合到植物细胞DNA中。

（3）将含有导入了目的基因的愈伤组织试管放在______上，进行液体悬浮培养获得______，进而培育成抗虫植株

Answer 1

【答案】SmaI和PstI CaCl2 D 显微注射 转座因子 摇床 胚性细胞

【解析】

1、由题干信息“PstⅠ、SmaⅠ、AluⅠ表示限制性核酸内切酶切割位点”，不能选用AluⅠ，这样会破坏目的基因。

2、标记基因的作用是：为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

（1）分析图一可知，获取目的基因可用限制酶SmaI和PstI或只使用PstI，切割质粒时必需保证标记基因不能全部被破坏，因此为获得大量抗虫基因，且保证形成重组质粒时，目的基因以唯一方向接入，可选用Sma I和PstI分别切割目的基因和Ti质粒，再用DNA连接酶连接，形成重组DNA分子，此时的重组DNA分子中的标记基因为amp；再与经过CaCl2处理（使其成为感受态细胞）的无amp和tet的农杆菌液混合，使重组DNA进入农杆菌。再利用农杆菌转入培养的玫瑰细胞，使目的基因导入玫瑰细胞中。

（2）抗虫基因亦可通过显微注射方法导入植物细胞，抗虫基因进入细胞后，可利用转座因子整合到植物细胞DNA中。

（3）将含有导入了目的基因的玫瑰细胞的试管放在摇床上震荡，进行液体悬浮培养获得胚性细胞，进而培育成抗虫玫瑰，原理是植物细胞具有全能性