(五)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点.图l.图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题:(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后.分别含有个游离的磷酸基团．(2)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒.不能使用SmaⅠ切割.原因是．(3)与只使用EcoR I相比较.使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒.外源DNA的优点在于可以防止 � 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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（五）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有

个游离的磷酸基团．
（2）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是

．
（3）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止

．
（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，需加入

酶．重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了

．
（5）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在

的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测．
（6）若用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点．

考点：基因工程的应用

专题：

分析：基因工程育种的原理是基因重组，具体操作步骤是：获取目的基因、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测盒鉴定．关注限制酶具有特异性，切割目的基因和运载体需要同一种限制酶．DNA连接酶连接连接目的基因和运载体限制酶切割的末端位置．基因表达载体上有标志基因，一般是抗性基因，目的是鉴定和筛选含有目的基因的细胞．大肠杆菌突变体丧失吸收蔗糖能力，利用选择性培养基，筛选出所需要的菌种．

解答： 解：
（1）质粒为小型环状的DNA分子，环状DNA分子中没有游离的磷酸基团；经Sma切割后在切口处每端各含1个游离的磷酸基团．     故答案为：0，2
（2）若用Sma切割质粒和外源DNA，则质粒中作为标记基因的抗性基因的结构被破坏，外源DNA中目的基因的结构也会被破坏．     故答案为：SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
（3）若只使用EcoR切割目的基因和外源DNA，则除了含目的基因的片段和质粒连接外，质粒和含目的基因的片段可能会自身连接而环化．     故答案为：质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化．
（4）含目的基因的片段与质粒连接形成重组质粒，需DNA连接酶将两个DNA片段的末端“缝隙”连接起来．重组质粒中的抗性基因是作为标记基因，便于鉴别和筛选含有目的基因的细胞．        故答案为：DNA连接       鉴别和筛选含有目的基因的细胞
（5）目的基因为蔗糖转运蛋白基因，所用的受体细胞为丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，若将重组质粒导入受体细胞，则受体细胞应能从培养基中吸收蔗糖，故应在以蔗糖为惟一碳源的培养基上进行培养．     故答案为蔗糖为唯一含碳营养物质
（6）从题目的已知条件看，该质粒共有碱基14kb，在质粒上有MboI酶的两个切点，有EcoRV酶的一个切点，再根据二者共切后的片段分成情况，即可绘制出在质粒上两种酶的切点．    故答案为：

点评：本题综合考查基因工程的工具与操作过程，意在考查考生的识图分析与应用知识的能力

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．
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