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    下图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

    （1）构建表达载体需要的酶是：????????????????????????? ，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、??????????? 、???????? 、终止子和复制原点等。

    （2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418 是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是_?????????????????????????????????? 。

    （3）图中所用的胚胎干细胞来自于??????????????? 。

    （4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的??????????? 位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是??????????????? 。

    （5）可以使用?????????? __方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

     

    【答案】

    （1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶、标记基因、启动子（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞（3）早期胚胎或原始性腺（4）内细胞团?? 同期发情处理（5）抗原-抗体杂交

    【解析】

    试题分析:（1）构建表达载体需要限制性核酸内切酶进行切割，目的基因与运载体结合也离不开DNA连接酶。基因表达载体必不可少的几部分包括标记基因、启动子、终止子和复制原点等。（2）导入目的基因的会表现出抗生素的抗性来，添加G418的目的是选出导入目的基因的胚胎干细胞。（3）胚胎干细胞可从早期胚胎或原始性腺中获得。（4）囊胚期的细胞已经开始分化为内细胞团和滋养层细胞。将目的基因要注入内细胞团的位置。对代孕的母鼠要用激素处理，目的是同期发情处理，处于相同的生理状态。（5）对目的基因的检测和鉴定分为三步：首先用DNA分子杂交技术检测是否插入目的基因；其次用分子杂交技术检测是否转录出来mRNA;最后用抗原-抗体杂交技术检测是否翻译成蛋白质。

    考点：本题考查了基因工程的相关知识。意在考查考生的理解能力及理论联系实际，运用所学知识解决自然界中的一些生物学问题的能力。

     

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源：2012届山东省青岛市高三统一质量检测理科综合（生物部分） 题型：综合题

    （8分）【生物—现代生物科技专题】
    下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，据图回答相关问题：

    （1）若需在短时间内获得较多的GFP基因，通常采用_________技术。
    （2）过程①是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要把GFP基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
    （3）③过程在使用合成培养基进行培养时，通常需要加入     等天然成分。
    （4）②过程通常采用的技术是____________________；在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是                。
    （5）④过程通过         技术实现。科学家欲获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好、形态正常的桑椹胚或       ，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。

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    科目：高中生物 来源：2010年吉林省四校高二下学期期中联考生物卷 题型：综合题

    2008年诺贝尔化学奖授予三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白（GFP）会发出绿色荧光，可借助荧光跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：
                          ①          ②          ③         ④         ⑤
    请根据上述材料回答下列问题：
    （1）上述流程中，作为目的基因的是＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （2）在培育绿色荧光小鼠的工程中，基因表达载体的构建是核心。一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、启动子、＿＿＿＿基因等部分。
    （3）过程①用到的工具酶有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ ，过程②采用的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，过程④利用的生物技术是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
    （4）为迅速增加绿色荧光小鼠的数量，可采用试管动物技术。在这项技术中，首先要做的是体外受精和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。哺乳动物的体外受精主要包括＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、精子的获取和受精等几个主要步骤。
    （5）为提高胚胎的利用率，可采用＿＿＿＿＿＿＿＿技术，应该选择发育良好、形态正常的＿＿＿＿＿＿＿＿或囊胚进行分割。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将＿＿＿＿＿＿＿＿进行均等分割。

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    科目：高中生物 来源：2010年长春市高中毕业班第二次调研测试（理科综合生物部分） 题型：综合题

    [生物——选修3现代生物科技专题] (15分)
    2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP) 方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白(GFP)会发出绿色荧光，可借助荧光跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

    请根据上述材料回答下列问题：
    (1)上述流程中，作为目的基因的是        。
    (2)在培育绿色荧光小鼠的过程中，基因表达载体的构建是核心。一个完整的基因表达    载体至少包括目的基因、启动子、终止子、        基因等部分。
    (3)过程①用到的工具酶有        ，过程②采用的方法是        ，过程③利用的生物技术是        。
    (4)为迅速增加绿色荧光小鼠的数量，可采用试管动物技术。在这项技术中，首先要做的是体外受精和早期胚胎的培养。哺乳动物的体外受精主要包括          、精子的获取和受精等几个主要步骤。
    (5)为提高胚胎的利用率，可采用      技术，应该选择发育良好、形态正常的     或囊胚进行分割。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将        进行均等分割。

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    科目：高中生物 来源：2013-2014学年湖南省十三校高三3月第一次联考生物卷（解析版） 题型：综合题

    （15分）下图为绿色荧光小鼠制备流程图， Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

    （1）构建表达载体需要的酶是：????????????????????????? ，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、??????????? 、???????? 、终止子和复制原点等。

    （2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是_?????????????????????????????????? 。

    （3）图中所用的胚胎干细胞来自于?????????????? 。

    （4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的??????????? 位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是??????????????? 。

    （5）可以使用?????????? __方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

     

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