Question

【题目】下图是通过基因工程方法将人表皮细胞生长因子基因（EGF）和TCS基因连接起来，利用小鼠生产人表皮生长因子——天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图。请回答：

（1）为了建立含有EGF的cDNA文库，应从健康人体的______细胞中提取总mRNA合成cDNA。从cDNA文库中提取的EGF的长度比从基因组文库中提取的EGF______。

（2）在①过程中，应使用的限制酶是_________，在融合蛋白基因的首端还应插入_____。

（3）将重组质粒导入大肠杆菌前，需先用_________处理大肠杆菌。为了筛选含重组质粒的大肠杆菌，首先置于含有_________的培养基进行培养，获得大量重组质粒后，将其再移到小鼠体内。

（4）乙图表示培育具有人表皮细胞生长因子基因（EGF）和TCS基因融合基因的小鼠的基本过程示意图。①过程涉及细胞间的_________和融合过程，将重组质粒转入到受精卵中采用_________方法，经过②_________和③过程，可获得转基因小鼠。小鼠出生后可以从其尾巴细胞中提取_________分子进行分析，通过_________方法，检测小鼠细胞是否含有人融合基因。

Answer 1

【答案】表皮细胞 短 BamHI 、 sphI 启动子 Ca+ （氯化钙） 氨苄青霉素 识别 显微注射 早期胚胎培养(动物细胞培养) DNA DNA分子杂交

【解析】

分析甲图：图示是将人表皮生长因子基因（EGF）和TCS基因连接起来，利用大肠杆菌生产人表皮生长因子--天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图，图中①表示基因表达载体的构建过程。

图乙中，①表示雌、雄小鼠进行杂交获得受精卵的过程，②表示胚胎培养的过程，③表示胚胎移植的过程。

（1）EGF基因只在表皮细胞中表达，即只有表皮细胞中含有相应的mRNA，因此要获得EGF基因，应从健康人体的表皮细胞中提取其mRNA，通过逆转录法合成．通过逆转录法合成的EGF基因不含内含子、启动子等结构，因此其长度比从基因组文库中获取的EGF基因短。

（2）EGF基因两侧的限制酶是BamHI和SphI，因此在①过程中，应使用的限制酶是BamHI和SphI，而且在融合蛋白基因的首端还应插入启动子。

（3）将重组质粒导入大肠杆菌前，首先用Ca2+处理大肠杆菌，使其转变为感受态细胞。为了筛选含重组质粒的大肠杆菌，首先置于含有氨苄青霉素的培养基进行培养，获得大量重组质粒后，将其再移到小鼠体内。

（4）①过程涉及到细胞间识别与融合，将重组质粒通过显微注射的方法注入受精卵后，应进行②早期胚胎培养及③胚胎移植，可获得转基因小鼠。欲检测目的基因的存在，应提取转基因小鼠尾巴细胞中DNA分子予以分析。通过DNA分子杂交方法，检测小鼠细胞是否含有人融。