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    4．我国曾经发生过因“非典型性肺炎”而死亡的病例，经研究发现，该病是由SARS病毒（一种RNA病毒）感染所引起的疾病．SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体．某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作，其简要的操作流程如图：

    （1）实验步骤①所代表的反应过程是反转录．
    （2）步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用限制酶和DNA连接酶，后者的作用是将用限制性核酸内切酶切割的S蛋白基因和载体连接起来．
    （3）如果省略步骤②而将大量扩增的S蛋白基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S蛋白基因在大肠杆菌中不能复制，也不能合成S蛋白基因的mRNA．
    （4）为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用大肠杆菌中表达的S蛋白与SARS康复病人血清进行抗原-抗体特异性反应实验，从而得出结论．
    （5）步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列相同（填“相同”或“不同”），根本原因是表达蛋白质所用的基因相同．

    分析 根据逆转录的概念分析（1）．根据限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用分析（2）．根据S基因在大肠杆菌中不能进行复制，也不能转录分析（3）．根据抗原一抗体特异性反应分析（4）．根据基因控制蛋白质的合成分析（5）．

    解答 解：（1）实验步骤①RNA控制DNA合成，该过程是反（逆）转录．
    （2）步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B，必须使用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体，形成相同的粘性末端，再用DNA连接酶，形成重组DNA．
    （3）如果省略步骤③基因表达载体的构建，而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S基因在大肠杆菌中不能进行复制，也不能进行以其为模板合成S基因的mRNA（或转录）．
    （4）步骤④检测所表达的S蛋白的特征，可用大肠杆菌中表达的S蛋白与SARS康复病人血清进行抗原-抗体特异性反应实验，如果能够特异性的结合，说明表达成功．
    （5）步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列相同，根本原因是表达蛋白质所用的目的基因相同．
    故答案为：
    （1）反转录　
    （2）DNA连接　载体　
    （3）复制　合成S蛋白基因的mRNA
    （4）大肠杆菌中表达的S蛋白　 
    （5）相同　   表达蛋白质所用的基因相同

    点评 本题考查基因工程的步骤等相关知识，意在考查学生理解基因工程的工具和步骤，有一定的综合性．

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