Question

【题目】我国曾经发生过因“非典型性肺炎”而死亡的病例，经研究发现，该病是由SARS病毒(一种RNA病毒)感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作，其简要的操作流程如图：

⑴实验步骤①所代表的反应过程是______________________。

⑵步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶，DNA连接酶的作用是将用限制性核酸内切酶切割的________________和________________连接起来。

⑶如果省略步骤②而将大量扩增的S蛋白基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S蛋白基因在大肠杆菌中不能________________，也不能________________。

⑷为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用_______________与________________进行抗原—抗体特异性反应实验，从而得出结论。

⑸步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________(填“相同”或“不同”)，根本原因是______________________。

Answer 1

【答案】 反转录 载体 S蛋白基因 复制　 合成S蛋白基因的mRNA 大肠杆菌中表达的S蛋白 SARS康复病人血清 相同 表达蛋白质所用的基因相同

【解析】试题分析：该题考查基因工程的应用方面的知识，由图可知①为通过逆转录合成目的基因，②为构建重组质粒，③④为将目的基因导入到受体细胞，⑤⑥目的基因的表达。

（1）实验步骤①由RNA为模板，合成 DNA的构成，该过程是逆转录。

（2）步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B，必须使用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体，形成相同的粘性末端，再用DNA连接酶，形成重组DNA。

（3）如果省略步骤②基因表达载体的构建，而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S基因在大肠杆菌中不能独立进行复制，也不能进行以其为模板合成S基因的mRNA(或转录)过程。

（4）步骤④检测所表达的S蛋白的特征，可用大肠杆菌中表达的S蛋白与SARS康复病人血清进行抗原—抗体特异性反应实验，如果能够特异性的结合，说明表达成功。

(5)步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列相同，根本原因是表达蛋白质所用的目的基因相同。