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    6．图1为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

    （1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒．限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点．
    ①画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端．

    ②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？可以连接理由是因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的．
    （2）以图2示中基因工程的核心是②（用序号表示），除了目的基因和标记基因外，其上还应包括启动子和终止子．
    （3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术．目的基因能否在受体母猪体内稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上．这需要检测才能确定，检测采用的方法是DNA分子杂交技术．
    （4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②①③④（用数字表示）．
    ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸  ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
    ③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）             ④表达出蓝色荧光蛋白．

    分析 根据题意和图示分析可知：①表示目的基因的获取，②表示基因表达载体的构建，③表示将目的基因导入猪胎儿的成纤维细胞，经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞与另一只猪的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞．重组细胞经过早期胚胎培养到桑椹胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母猪子宫内，最后生成转基因克隆猪．由此可见，该过程中利用基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术．

    解答 解：（1）①质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端如图所示：

    ②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，所以能够连接起来．
    （2）基因工程的核心是基因表达载体的构建．基因表达载体含有绿色荧光蛋白基因（目的基因）、启动子、终止子和标记基因．
    （3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术．目的基因能否在受体母猪体内稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上，这需要采用DNA分子杂交技术进行检测才能确定．
    （4）采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列、①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸、③蓝色荧光蛋白基因的修饰和④表达出蓝色荧光蛋白．
    故答案为：
    （1）①
    ②可以连接      因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的
    （2）②启动子      终止子
    （3）显微注射技术  目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上  DNA分子杂交技术
    （4）②①③④

    点评 本题考查基因工程和胚胎工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．

    练习册系列答案
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