Question

【题目】为了研究手机屏幕上的细菌数量和种类，有人做了下图所示的实验。回答下列问题：

(1)该实验需制备固体培养基，制备固体培养基的操作顺序是：计算一称量一____一____ 一倒平板。为了防止培养基被杂菌污染，倒平板时应该注意： ___（写出两点）。

(2)该实验在平板培养基上的接种方法是 ___法。培养一段时间后，通过观察菌落的____等特征（写出两点），可知手机上存在多种微生物。

(3)若按图中方法取样，测定某手机屏幕上的细菌数量，从10 mL菌悬液中取出1 mL，稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为38、40和42，则该手机屏幕的细菌数为 ___个/cm2。该方法计数的结果往往比实际结果偏 ___（填“高”或“低”），原因是___ 。

Answer 1

【答案】溶化 灭菌 装有培养基的锥形瓶口经火焰灼烧、培养基从培养皿和皿盖之间的缝隙倒入、平板冷却凝固后倒置 涂布平板 形态、大小、颜色、隆起程度 1.6×104 低 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

【解析】

1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
2、两种纯化细菌的方法的比较：

	优点	缺点	适用范围
平板划线分离法	可以观察菌落特征，对混合菌进行分离	不能计数	适用于好氧菌
稀释涂布平板法	可以计数，可以观察菌落特征	吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延	适用于厌氧，兼性

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基其基本过程为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板五个步骤，为了防止培养基被杂菌污染，倒平板时应该注意装有培养基的锥形瓶口经火焰灼烧、培养基从培养皿和皿盖之间的缝隙倒入、平板冷却凝固后倒置。

（2）由图中3组培养结果可知，该实验接种微生物的方法为稀释涂布平板法，由于不同菌落的形态特征不同，故可根据观察菌落的形态、大小、颜色、隆起程度等，可知手机上存在多种微生物。

（3）统计菌落数分别为38、40、42，一个方格的面积为5cm×5cm=25cm2，该手机屏幕的细菌密度为=（38+40+42）÷3÷0.1×10×100÷25=l.6×104个/cm2，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此用稀释涂布平板法统计的活菌数目往往比实际值偏低。