Question

【题目】嗜热土壤芽胞杆菌产生的葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶。

（1）根据图1、图2相关酶的切点相关信息，为了将BglB基因和质粒DNA重组，应用_________酶分别切割质粒DNA和含BglB基因的DNA。

（2）要形成含BglB基因的重组质粒，还需加入[_________]酶。

A．DNA合成酶 B．β﹣葡萄糖苷酶

C．限制性内切酶 D．DNA连接酶

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________。

（4）据图3、4可知，要想高效利用BglB酶降解纤维素，应考虑哪些因素？_________。因此，BglB酶降解纤维素的反应温度最好控制在__________________。

A.50°C B.60°C C.70°C D.80°C

Answer 1

【答案】BamHI D 转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶 酶的活性和酶的热稳定性 B

【解析】

图1为质粒DNA，抗生素抗性基因为标记基因，标记基因上有Xbol、Pstl酶的酶切位点。图2为含有目的基因BglB基因的DNA片段，目的基因两端有BamHⅠ、Xbol、EcoRⅠ、NdeⅠ的酶切位点。分析图3，60～70℃时该酶的相对活性最高，而在40℃和80℃活性均降低，并且酶在高温条件下会失活。分析图4，随着保温时间的延长，80℃保温30分钟后，BglB酶会失活；而随着保温时间的延长，70℃条件下的酶活性下降明显。50℃和60℃条件下酶可以较长时间保持其活性。

（1）根据图1、图2相关酶的切点相关信息，为了将BglB基因和质粒DNA重组，应用BamHI酶分别切割质粒DNA和含BglB基因的DNA，Xbol、Pstl酶会破坏标记基因。

（2）要连接质粒和目的基因需要加入DNA连接酶。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶。

（4）酶的活性受温度影响，据图3、4可知，要想高效利用BglB酶降解纤维素，应考虑酶的活性和酶的热稳定性。据图3、4可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会失活；图3中看出，60～70℃时该酶的相对活性最高，而图4中看出，随着保温时间的延长，70℃条件下的酶活性下降明显，因此为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在60℃。