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    17．人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL-2），该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解．研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（ HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白，其技术流程如图所示．请据图回答：
    （1）图中②表示逆转录过程，③过程需要限制酶EcoRI、限制酶BglⅡ和DNA连接酶．
    （2）限制酶的功能是识别双链DNA分子中特定的脱氧核苷酸序列，并断开两个特定的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键；限制酶BglⅡ的识别位点是表达载体1中的a（填“a”或“b”）．
    （3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列不能含有终止（填“起始”或“终止”）密码子，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白．
    （4）应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．

    分析 分析题图：①表示从人的外周学细胞去mRNA；②表示以mRNA为模板逆转录形成cDNA的过程；③表示基因表达载体的构建过程，需要限制酶和DNA连接酶．目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，而表达载体1上已有EcoRⅠ，因此位点a应含有BglⅡ．

    解答 解：（1）分析图解可知，图中②表示由mRNA为模板合成DNA的过程，即表示逆转录过程，③过程表示基因表达载体的构建，该过程需要限制酶和DNA连接酶，根据目的基因上的限制酶的切割位点可知，限制酶应包括限制酶EcoRI、限制酶BglⅡ．
    （2）限制酶的功能是识别双链DNA分子中特定的脱氧核苷酸序列，并断开两个特定的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键；目的基因IL-2cDNA和表达载体1在构建表达载体2时需先用限制酶切割让二者获得相同的黏性末端，然后在DNA连接酶的作用下重新组合．根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，而表达载体1上已有EcoRⅠ，因此位点a应含有BglⅡ．
    （3）融合基因转录出的mRNA中与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有终止密码，才能成功表达出IL-2-HsA融合蛋白．否则HSA蛋白将无法合成．
    （4）应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．
    故答案为：
    （1）逆转录      限制酶EcoRI、限制酶BglⅡ和DNA连接
    （2）双链DNA分子中特定的脱氧核苷酸序列，两个特定的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键  a
    （3）终止
    （4）抗原-抗体杂交

    点评 本题结合流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题．

    练习册系列答案
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