Question

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导人油菜细胞并获得了转基因油菜品种．
（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用

 

法从陆地棉基因文库中获取酶D基因．从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．所含三种限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切点如图所示．则用

 

和

 

酶处理两个基因后，可得到

 

 （填图中字母）端相连的融合基因．

（2）将上述融合基因插入如图所示质粒的T-DNA中．构建

 

并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含

 

的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用

 

培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．
（3）剪取油菜的叶片放入染液中一段时间，此过程的目的是

 

．进一步筛选后获得转获因油菜细胞．该细胞通过

 

技术．可培育成转基因油菜植株．
（4）提取上述转基因油菜的mRNA．在逆转录酶的作用下获得cDNA．再依据

 

的DNA片段设计引物进行扩增．对扩增结果进行检侧．可判断融合是否完成

 

．
（5）用

 

法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：基因文库包括cDNA文库、基因组文库等．某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库，而用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段属于cDNA文库

解答： 解：（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因．
（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．
（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞．该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株．
（4）提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成转录．
（5）用抗原-抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．
故答案为：
（1）PCR    ClaⅠDNA连接    A、D  
（2）基因表达载体（或重组质粒）    四环素       液体
（3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞   植物组织培养
（4）融合基因      转录 
（5）抗原-抗体杂交

点评：本题以增加油菜种子的含油量为材料背景，考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．