Question

【题目】高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。请分析回答下列问题：

（1）按功能分，Ⅰ号培养基称为______；该培养基中必须以______作为唯一碳源。过程①②合称为______，若该过程所得平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2mL，稀释倍数为105时，则每毫升样品中的细菌数约为______个。

（2）对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌，目的是______。

（3）在1号培养基上挑出能产生淀粉酶的嗜热菌菌落的鉴别方法是培养基上会出现以该菌的菌落为中心的______；也可将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，看到如下图所示情况，可判断图中______的菌落含有所需菌种。

（4）如果高温淀粉酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择下图中的______（填写字母）固定化工艺。

Answer 1

【答案】选择培养基 淀粉 稀释涂布平板法 2.5×107 使培养基中所有微生物永远丧失生长繁殖能力（或杀死培养基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或防止杂菌污染） 透明圈 周围不显蓝色 C

【解析】

本实验目的是从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，因此需要制备以淀粉为唯一碳源的选择培养基；图示可见，①过程是稀释嗜热菌培养液的过程，接种嗜热菌即②过程常用稀释涂布平板法。培养基配制和灭菌过程中，应注意先调节pH，后灭菌，一般培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法，高压蒸汽灭菌法是可杀灭包括芽胞在内的所有微生物的一种灭菌方法。部分嗜热菌在Ⅰ培养基上生长时可产生淀粉酶，分解培养基中的淀粉后会在菌落周围形成透明圈，透明圈越大，说明产生的淀粉酶越多，因此应挑选透明圈大的菌落接种在Ⅱ号培养基上继续培养。

（1）Ⅰ号培养基称为选择培养基，该培养基中必须以淀粉作为唯一碳源。过程①②为稀释涂布平板法；若平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2mL，稀释倍数为105时，则每毫升样品中的细菌数约为50÷0.2×105=2.5×107个。

（2）对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌，是为了杀灭包括芽胞在内的所有微生物，防止杂菌污染。

（3）1号培养基上的嗜热菌可产生淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；若菌落含有可产淀粉酶的嗜热菌，淀粉会被分解，加碘液后不显蓝色，因此可判断图中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种。

（4）据图分析，A是物理吸附法，B是化学结合法，C是包埋法，由于酶容易从包埋材料中漏出，所以一般不使用包埋法，化学结合法可能会对酶活性产生影响，想要酶活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择图中的C。