Question

【题目】在白酒发酵的窖池中，当培养液的pH≤4.5时，酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制，甚至停止。耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的环境下继续表现出较强发酵能力，适宜作白酒发酵生产用菌种，为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌，研究者进行了相关实验，请回答下列有关问题：

（1）在发酵过程中，窖池中培养液的pH会逐渐下降，原因是_________________________。

（2）取窖底泥，溶于10mL无菌水中，再取1mL 上清液接入一定量的麦芽汁培养基中培养，其目的是_____________________，2天后分别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上，培养结果见下表。为选择合适的菌种，根据培养结果，可从表格中pH范围为_________的培养基中获得菌种。注：“+”越多表示菌体长得越好

pH=5	pH=4	pH=3	pH=2.5	pH=2
+++++	++++	+++	++	+

（3）通过图示_____________法进行纯化培养，取最终的酵母菌稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，要将涂布器___________后才能进行操作。在恒温培养箱中培养一段时间后，其中某组的3个平板上菌落数分别为99个、92个、94个，则可以推测酵母菌液中每毫升含菌数为_____个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是_____________。

（4）实验获得了三个耐酸性较强的酵母菌菌株，特点如下表。

菌株	A	B	C
特点	pH≤3.5时，生长代谢正常、优于其它常规菌种	pH≤3.5时，生长代谢正常，pH4～6时不正常	pH2.5～6，生长代谢正常、优于其它常规菌种

依据菌株特点，研究者认为________菌株更适合作为白酒发酵菌株，作出这一判断的理由是____________________________________________________。

Answer 1

【答案】 细胞呼吸产生CO2，可形成碳酸，代谢过程还产生了其他酸性物质 使得酵母菌大量繁殖 2-3 稀释涂布平板法 灼烧冷却 9.5×108 有的菌落可能是由2个或多个菌体形成的 C 该菌对pH的耐受范围更大，发酵初期pH近中性，C菌种适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，C菌种依然能正常生长

【解析】【试题分析】

本题以选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌为题材，考查微生物的分离与计数的相关知识。意在考查考生对微生物的实验室培养和应用知识的掌握情况，以及实验分析能力。考生要能从题目中提取有用的信息，再结合题意，梳理和回顾相关知识，对各小题进行解答。对第（2）小题的表格分析可知，实验的自变量是pH，因变量是菌体的生长情况：随着pH的降低，菌种生长得越来越差。根据第（3）小题的图解应该能判断出酵母菌液被稀释了106倍，据此答题。

（1）在发酵过程中，窖池中培养液的pH会逐渐下降的原因是：酵母菌细胞呼吸产生CO2，可形成碳酸，代谢过程还产生了其他酸性物质。

（2）取窖底泥，溶于10mL无菌水中，再取1mL 上清液接入一定量的麦芽汁培养基中培养，其目的是使得酵母菌大量繁殖；耐酸性酵母菌能在pH≤3.5的环境下继续表现出较强发酵能力，适宜作白酒发酵生产用菌种，所以根据培养结果，可从表格中pH范围为2-3的培养基中获得菌种。

（3）图示纯化培养的方法为稀释涂布平板法；在培养基上进行涂布时，要将涂布器灼烧冷却后才能进行操作；根据图解可知菌液被稀释了106倍（M），该稀释度下平板上生长的平均菌落数C＝(99＋92＋94)÷3＝95个，涂布平板时所用的稀释液的体积V＝0.1mL，根据公式可知，酵母菌液中每毫升含菌数为(C÷V)×M＝(95÷0.1)×106＝9.5×108个；由于有的菌落可能是由2个或多个菌体形成的，所以运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小。

（4）根据表格分析可知，C菌对pH的耐受范围更大，发酵初期pH近中性，C菌种适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，C菌种依然能正常生长，所以C菌株更适合作为白酒发酵菌株。