为了提高乙肝疫苗的预防效果.科学家们对于该疫苗的研发过程做如下的改进:提取乙肝病毒(HBV)基因重组后.与β-半乳糖苷酶基因结合.形成重组质粒BPT.随后的操作如图2.请回答下列问题:(1)在图一中 (A/B)插入终止子．构建重组质粒BPT必须使用作为工具酶．(2)从大肠杆菌中提取融合蛋白P-BPT仍需进一步修饰.纯化．其主要原因是因为大肠杆菌不具� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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为了提高乙肝疫苗的预防效果，科学家们对于该疫苗的研发过程做如下的改进：提取乙肝病毒（HBV）基因重组后，与β-半乳糖苷酶基因结合，形成重组质粒BPT（如图1），随后的操作如图2，请回答下列问题：

（1）在图一中

（A/B）插入终止子．构建重组质粒BPT必须使用

作为工具酶．
（2）从大肠杆菌中提取融合蛋白P-BPT仍需进一步修饰、纯化．其主要原因是因为大肠杆菌不具备

（细胞器）．
（3）实验中抽取小鼠脾的淋巴细胞进行细胞培养，在培养基中需要添加

防止杂菌生长．从分子水平上使用

对特异性免疫应答结果进行检测．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因的检测与鉴定：探针--用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段．
1．分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术
2．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
（例：用虫食用棉花，观察其存活情况，来鉴定棉花是否具有抗虫特性．）
真核细胞中，分泌蛋白的合成与分泌过程：核糖体合成蛋白质→内质网进行粗加工→高尔基体进行再加工→细胞膜，整个过程还需要线粒体提供能量．

解答： 解：（1）根据题意可知，提取乙肝病毒（HBV）基因重组后，与β-半乳糖苷酶基因结合，启动子在组合基因的首端，终止子在组合基因的末端，从而终止基因的转录．构建基因表达载体的工具酶包括限制酶和DNA连接酶．
（2）真核细胞中，分泌蛋白的合成与分泌过程：核糖体合成蛋白质→内质网进行粗加工→高尔基体进行再加工→细胞膜，而原核细胞中只有核糖体一种细胞器，即大肠杆菌中没有内质网和高尔基体，不能对该蛋白质进一步修饰、纯化．
（3）在动物细胞培养的过程中，需要在培养基中添加抗生素，以抑制杂菌的生长．从分子水平上使用抗原-抗体杂交对特异性免疫应答结果进行检测．
故答案为：
（1）B 限制酶，DNA连接酶
（2）内质网、高尔基体
（3）抗生素抗原-抗体杂交

点评：本题考查基因工程和细胞工程的有关知识，要求考生能够识记基因工程的工具酶；理解基因表达载体中启动子和终止子的功能；识记原核细胞和真核细胞结构的异同点，掌握与分泌蛋白形成有关的细胞器等，再结合所学知识准确答题．

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