Question

【题目】内皮素（ET）自1988年发现以来，一直是人们研究的热点。它不仅存在于血管内皮，也广泛存在于各种组织和细胞中，是调节心血管功能的重要因子，对维持基础血管张力与心血管系统稳态有重要作用。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ETA是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA基因在细胞中高效的表达，其过程如图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为，限制酶XhoⅠ的识别序列为。请据图分析并回答下列问题：

（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、dNTP和 酶等。完成过程①②③的目的是 。

（2）过程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是 。用两种限制酶切割获得不同的黏性末端，其主要目的是 。

（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子的作用是 ，除图示结构外，完整的基因表达载体还应具有 等结构（至少写出两个结构）。

（4）过程⑥要CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的 细胞。

（5）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是 。

（6）人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体,内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后,会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，试解释原因： 。

Answer 1

【答案】

（1）反转录（逆转录） 获取目的基因（ETA基因）

（2） 使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化

（3）RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录 复制原点、终止子

（4）感受态

（5）检测ETA基因能否表达及表达量

（6）ETA能与内皮素结合,减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合,抑制了内皮素对黑色素细胞的增殖和黑色素的形成

【解析】