Question

【题目】为了提高水稻的抗倒伏能力，科研人员从其他植物中得到矮杆基因C（图1），将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入水稻中。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）用__________构建重组质粒；一般使用__________将重组质粒导入农杆菌。

（2）用含C基因的农杆菌侵染水稻的__________，将C基因导入细胞；在培养基中添加__________，筛选被转化的水稻细胞；要得到相应的水稻植株，要利用__________。

（3）用__________检测C基因是否整合到染色体上；此外，还需要在个体水平上进行检测。如果检测显示C基因整合到染色体上，但水稻并没有矮化，请分析可能的原因：__________；__________。（至少答两点）

Answer 1

【答案】限制性核酸内切酶EcoRI和DNA连接酶 感受态法/Ca2+处理法 愈伤组织 潮霉素 植物组织培养技术 分子杂交方法/DNA分子探针法 整合到染色体上的C基因没有表达（转录） C基因在水稻细胞中的表达产物没有相应的功能

【解析】

分析题图：图1矮杆基因C的两端有EcoRI酶识别位点，图2质粒有EcoRI和BamHI酶识别位点，所以对基因C和质粒用同一种酶EcoRI酶切割，再用DNA连接酶连成重组质粒，通过感受态法将重组质粒导入农杆菌中，让含C基因的农杆菌侵染水稻。

（1）构建重组质粒时，应用同一种酶限制性核酸内切酶EcoRI分别切割目的基因和运载体，并用DNA连接酶连成重组质粒。用感受态法/Ca2+处理法将重组质粒导入农杆菌。

（2）用含C基因的农杆菌侵染水稻的愈伤组织，将C基因导入细胞；根据重组质粒中的抗生素基因，在培养基中添加潮霉素，筛选被转化的水稻细胞；利用植物组织培养技术，将转基因水稻细胞培育成转基因植株。

（3）检测C基因是否整合到染色体上采用分子杂交方法/DNA分子探针法。如果检测显示C基因整合到染色体上，但水稻并没有矮化，则可能是整合到染色体上的C基因没有表达（转录）或C基因在水稻细胞中的表达产物没有相应的功能。