Question

8．微生物的抗性突变是自发产生的还是与相应的环境因素有关．有人设计下列实验，以研究探讨该问题．实验选用对链霉素敏感的大肠杆菌K12．培养基3、7、11中含有链霉素，其它培养基中不含链霉素．请据实验回答：
（1）将原始对链霉素敏感大肠杆菌K12菌种涂布在培养皿1的表面培养，接着通过如图“印章”将培养皿1中的菌群“印”在培养皿2、3上培养．“印章”位置保持不变．培养皿3根据其功能，称为选择培养基．“印章”使用前需作灭菌处理．
（2）培养基3的A点处有菌落生长，将培养基2中相应的A点位置的菌落上挑出少量移入培养基4中．如图反复几次实验．请根据实验现象解释“微生物的突变是自发的还是环境因素导致的”：自发突变的，原因是因为抗链霉素菌种的获得是从没有接触过链霉素的敏感细菌中获得的．
（3）要分离出单个菌落，除了本实验中的涂布法外，还可以用平板划线法．
（4）上述不含链霉素培养基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培养基．
（5）现有5种营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序，于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响，结果如表所示．根据以下结果，推测这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G．

物质	培养基中加入的物质
突变体	A	B	C	D	E	G
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	+	-	+

（+：表示生长-：表示不生长）

Answer 1

分析 1、影印法接种的具体过程是：将待测的浓缩菌悬液涂在合适的平板上，等其长好后作为母平板（每平板上的菌落控制在50～300个）；用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章（即接种工具）；然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒的印章上，轻轻印一下；再把此印章在另一含有选择培养基的平板上轻轻印一下，经培养后，选择培养基平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较影印平板与母平板上菌落生长情况，即可从相应位置的母平板上选出待测的突变型菌落．影印法最初是为证明微生物的抗药性突变是自发的、与相应的环境因素无关而设计的实验，目前已广泛应用于营养缺陷型的筛选以及抗药性菌株筛选等研究工作中．
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）培养基3加入了链霉素，只有抗链霉素大肠杆菌K12才能在上面生长，所以是选择培养基；印章在使用前必须进行灭菌处理，以消除印章上的杂菌对实验结果的影响．
（2）通过题图及问题描述分析可知，抗链霉素菌种的获得是从没有接触过链霉素的敏感细菌中获得的，所以抗链霉素菌种的突变是自发突变，不是环境因素引起．
（3）由题图看出，接种时用的是稀释涂布平板法，除此以外分离菌种常用的方法还有平板划线法．
（4）题图中不含链霉素的培养基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培养基．
（5）由表格可知，加入G，5种突变体都能在上面生长，加入D，4种突变体能在上面生长，加入B，3种突变体能在上面生长，加入C，2种突变体能在上面生长，加入A，1种突变体能在上面生长，加入E，5种突变体都不能在上面生长．所以这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G．
故答案为：
（1）选择    灭菌
（2）自发突变的      因为抗链霉素菌种的获得是从没有接触过链霉素的敏感细菌中获得的
（3）平板划线
（4）牛肉膏蛋白胨培养基
（5）E→A→C→B→D→G

点评 本题主要考查微生物的影印法培养，意在考查选择培养的过程，提高学生的实验过程分析能力和相关实验技能．