Question

羊绒素有“软黄金”之称，内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊是我国的两大产绒品种．我国生物学家运用现代生物技术培育出了转基因绒山羊，其过程如图1所示：

（1）在辽宁绒山羊细胞中获取的IGFI基因在导入胚胎干细胞之前须

 

，这是基因工程操作的核心步骤，若该过程使用的质粒是双链闭合环状的DNA分子，用两种识别序列不同的限制酶M和N切割（识别序列和切割位点如图2），通过凝胶电泳分离分析得下表．

使用限制酶	酶切结果（单位：Kb）
酶M	1.0、5.0、10.0
酶M+酶N	1.0、2.0、3.0、4.0、6.0

则：①在该质粒中，M酶与N酶的切割位点分别有

 

个．
②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，请将连接的结果表示出来：

 

；连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割：

 

．
（2）胚胎干细胞（ES）可由囊胚的

 

分离培养获得，转基因胚胎干细胞培养过程中，须保持培养箱中含有5%的CO₂的目的是

 

．所配制的培养液除了含有各种营养成分，满足适宜的温度和酸碱性外，还应注意调节培养的

 

，否则将影响细胞的正常生命活动．
（3）干细胞经扩大培养诱导分化为早期胚胎，随后即可植入经

 

处理的代孕母羊体内．
（4）请列举至少两种转基因克隆绒山羊培育过程中采用的现代生物技术：

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,动物细胞核移植技术

专题：

分析：1、根据题意，质粒是环状DNA分子，酶M将质粒切割成三个DNA分子片段，所以酶M的切割位点有3个．酶M和酶N共切割成5个片段，所以酶N的切割位点是2个．
2、由图2可知，酶M和酶N切割后的形成的黏性末端相同，故两者的末端可相互连接．

解答： 解：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
①由分析可知，M酶的切割位点是3个，M酶的切割位点是2个．
②由图可知，M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接形成或，连接后的碱基序列与酶M或酶N的切割位点都不相同，故不能M酶或N酶切割．
（2）胚胎干细胞可由囊胚的内细胞团分离培养获得．动物细胞培养过程中二氧化碳的作用是维持培养液的PH．配制的培养液要满足营养、适宜的温度、PH、渗透压等条件．
（3）胚胎移植过程需要对代孕母羊做同期发情处理．
（4）由图可知，转基因克隆绒山羊培育过程中采用的基因工程、早期胚胎培养、胚胎移植等技术．
故答案为：
（1）构建基因表达载体（构建重组DNA分子）
①3、2    ②   或       否
（2）内细胞团   维持培养液的PH      浓度（或渗透压）   　
（3）同期发情
（4）基因工程、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植

点评：本题考查胚胎工程相关知识，能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题．