Question

【题目】（一）回答下列有关生物技术实践的问题：

（1）某公司研发的一种培养大肠杆菌的培养基配方为：蛋白胨10克、葡萄糖5克、蔗糖5克、KH2PO4 2克、显色剂（伊红美蓝）0. 2g、琼脂12克，将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。根据用途划分，该培养基属于_______培养基，若要分离能分解尿素的细菌，需对培养基作出的两项调整是___________、___________。

（2）对同一浓度的脲酶生产菌稀释液，分别用血细胞计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验误操作，则前者的数量___________（填“多于”、“等于”或“小于”）后者，其原因是___________________。

（3）某科研工作者用特殊的化学物质将脲酶包裹，遇水后包裹层很快溶解，释放出来的酶迅速发挥催化作用。请说明这是否运用了酶的固定化技术及其理由：_____________________________。

（二）下图是治疗性克隆时获取病人胚胎干细胞的过程。

（1）图示方法一和方法二都使用了去核卵母细胞，主要是因为___________。在培养过程中除了添加糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还添加动物血清，原因是__________________________。

（2）将分离出的胚胎干细胞放入有分化诱导因子的培养液中，诱导其分化成所需类型细胞或器官，完成该过程的实质是____。在单克隆抗体制备过程中，诱导浆细胞与骨髓瘤细胞融合，此过程需要两次筛选，这两次筛选出的目标细胞分别为___；_______。

Answer 1

【答案】鉴别 将蛋白胨换为尿素， 琼脂换成琼脂糖 多于 前者产脲酶菌丝分散的或活菌和死菌一起计数，后者存在多个产脲酶菌形成一个菌落的情况或只计数活菌。 未运用酶的固定化技术，因为酶未固定在不溶于水的载体上，也不能重复利用。 卵母细胞的细胞质中有促进核基因表达的物质； 动物血清营养成分比较齐全，可以弥补人工培养基的不足。 基因的选择性表达； 杂交瘤细胞； 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。

【解析】

1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2、由于细菌分解在尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，PH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，PH升高，指示剂变红。

（一）

（1）分析培养基成分可知，培养基中加入显色剂，因此根据用途可以判断，该培养基属于鉴别培养基；培养基中的氮源为蛋白胨，若要分离能分解尿素的细菌需将培养基中蛋白胨换成尿素，将琼脂换成琼脂糖。

（2）对同一浓度的脲酶生产菌稀释液，分别用血细胞计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验误操作，则前者的数多于后者，其原因是前者产脲酶菌丝分散的或活菌和死菌一起计数，后者存在多个产脲酶菌形成一个菌落的情况或只计数活菌。。

（3）某科研工作者用特殊的化学物质将脲酶包裹，遇水后包裹层很快溶解，释放出来的酶迅速发挥催化作用。此过程未运用酶的固定化技术，因为酶未固定在不溶于水的载体上，也不能重复利用。

（二）

（1）方法一和方法二都使用了去核卵母细胞，主要是因为卵母细胞的细胞质可以给体细胞的细胞核提供表达全能性的环境。在培养过程中除了添加糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还添加动物血清，原因是动物血清营养成分比较齐全，可以弥补人工培养基的不足。

（2）将分离出的胚胎干细胞放入有分化诱导因子的培养液中，诱导其分化成所需类型细胞或器官，完成该过程的实质是基因的选择性表达。在单克隆抗体制备过程中，诱导浆细胞与骨髓瘤细胞融合，此过程需要两次筛选，这两次筛选出的目标细胞分别为杂交瘤细胞和能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。