Question

6．P5CS是植物合成脯氨酸的关键酶，脯氨酸有助于植物抵御干旱．下图是将P5CS基因转入烟草细胞获得耐旱烟草植株过程的示意图．

请回答：
（1）要将P5CS基因成功插入Ti质粒中，Ti质粒的T-DNA中应含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位点．
（2）检测P5CS基因是否整合到烟草细胞染色体DNA上，采用DNA分子杂交技术，转基因是否成功可以直接在个体水平上对转基因植物与非转基因植物的抗旱/耐旱性能进行比较．
（3）将转入P5CS基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，愈伤组织通过再分化发育成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素（生长素和细胞分裂素）．

Answer 1

分析 分析题图：图示是将P5CS基因转入烟草细胞获得耐旱烟草植株过程的示意图，其中①表示基因表达载体的构建过程；②表示将目的基因导入农杆菌细胞；③表示目的基因随着农杆菌的增殖而扩增；④表示脱分化过程；⑤表示再分化过程；⑥⑦表示个体发育过程．

解答 解：（1）由图可知，目的基因前有HindⅢ限制酶切割位点，后有SalⅠ限制酶切割位点，因此要将P5CS基因成功插入Ti质粒中，Ti质粒的T-DNA中应含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位点．
（2）检测目的基因是否整合到烟草细胞染色体DNA上，采用DNA分子杂交技术；转基因是否成功可以直接在个体水平上对转基因植物与非转基因植物的抗旱（或耐旱）性能进行比较．
（3）将转基因烟草细胞培育成完整的植株还需采用植物组织培养技术，该技术包括脱分化和再分化两个重要的步骤，即转基因烟草细胞首先经过脱分化过程形成愈伤组织，愈伤组织再经过再分化发育成完整植株；决定脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，尤其是生长素和细胞分裂素．
故答案为：
（1）T-DNA
（2）DNA分子杂交    抗旱/耐旱
（3）植物组织培养　   植物激素（生长素和细胞分裂素）

点评 本题结合将P5CS基因转入烟草细胞获得耐旱烟草植株过程的示意图，考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤；识记植物组织培养的过程及相关应用，能正确分析题图，并能从中提取有效信息准确答题．