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    【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

    请回答：

    (1)步骤①中，核移植技术需要把供体细胞核和去除______的MⅡ中期卵母细胞构建成重组细胞，重组细胞经过动物细胞培养再发育成重组胚胎。

    (2)ES细胞（胚胎干细胞）来源于早期胚胎和____，它在形态上的特性是____；在功能上的特性是_____。

    (3)步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。获取目的基因时，可以利用___技术扩增Rag2基因片段，该技术的前提是根据Rag2基因的______设计引物。

    若果要用HindⅢ和Pst I限制酶分别在含Rag2基因的DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段，为将该片段和载体连接，所选择的载体上也应具有的酶切位点的限制酶种类是_____。

    (4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞中的________，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

    【答案】细胞核 原始性腺 体积小、细胞核大、核仁明显 具有发育的全能性，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞 PCR 核苷酸序列 Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶 蛋白质

    【解析】

    本题中涉及到细胞核移植和基因工程和干细胞培养等技术手段，通过图中方法进行基因治疗小鼠没有免疫排斥现象。

    （1）细胞核移植的过程是将体细胞核移植到去细胞核的发育到MⅡ中期卵母细胞中。
    （2）胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）。胚胎干细胞在形态上的特性是体积小、细胞核大、核仁明显 ，功能上的特性是具有发育的全能性，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞 。

    （3）扩增目的基因用PCR技术可以短时间内获得大量目的基因，在扩增前需要提前根据已知的Rag2基因的核苷酸序列设计引物。为了使目的基因和载体能连接，目的基因和载体需要用相同的限制酶切割，切出相同的黏性末端便于连接，Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的，因此选择的载体上也应具有的酶切位点的限制酶种类是Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶。

    （4）检测基因是否表达用抗原-抗体杂交法，可提取治疗后小鼠骨髓细胞中的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

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