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    人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体（见图1）。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答：













    （1）此质粒的化学本质是　　　　　 ，它可以作为多种目的基因的（运）载体，原因是　　　　　 。ampr和tetr在基因工程中的主要作用是　　　　　　 。

    （2）人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。


    ①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据　　　　　　 推出

    　　　　　 序列，再推出　　　　　 序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与　　　　　　 重组后，再导入大肠杆菌内。

    ② 在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少　　　　　 ，不能　　　　　　 。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择　　　　　　 作为受体细胞。

    （1）DNA （核酸不给分，大肠杆菌的质粒只是DNA）      

    含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点 （外加载体的其它条件不错给分，错不给分）

    （2）① 氨基酸的排列顺序（A链、B链的一级结构给分） 

    　　　　信使RNA的碱基（核糖核苷酸的排列序列给分）   

    DNA（基因、）的碱基（脱氧核糖核苷酸给分）     

    不同质粒（２个质粒）

    ② 内质网、高尔基体等细胞器（答出任何一个内容均可得分，只答线粒体不给

    　　分，但如果与内质网、高尔基体任何一个细胞器给分）   

    对多肽链进行加工（添加形成二硫键；形成空间结构不给分，因大肠杆菌也　

    形成空间结够）      

    真核细胞（酵母菌）（人的瘤细胞给分）

    练习册系列答案
    年级 高中课程 年级 初中课程
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    科目：高中生物 来源：2012届北京市西城区高三上学期期末考试生物试卷 题型：综合题

    （10分）人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体（见图1）。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答：

    （1）此质粒的化学本质是          ，它可以作为多种目的基因的（运）载体，原因是          。ampr和tetr在基因工程中的主要作用是            。
    （2）人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。

    ①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据            推出
               序列，再推出          序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与            重组后，再导入大肠杆菌内。
    ② 在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少           ，不能            。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择             作为受体细胞。

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    科目：高中生物 来源：2013年上海市普陀区高三高考二模生物试卷 题型：综合题

    研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答

    1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是                          ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为        。

    2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是                。

    3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是              ， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是    ，这 两种酶作用的化学键都是          。

    4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。                      

    5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

    6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　                               　    　。

    7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无ampR和tetR  的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___       _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是___            __。

     

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    科目：高中生物 来源：2013届海南省高二下学期期中考试生物试卷（解析版） 题型：综合题

    目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图所示。

     

    (1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于                               。

    (2)pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。

                                                                          

    (3)pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复___     ___ 键，成功的获得了重组质粒。

     (4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___       _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是___            __。

     

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    科目：高中生物 来源：2011-2012学年北京市西城区高三上学期期末考试生物试卷 题型：综合题

    （10分）人工构建的大肠杆菌质粒pBR322是基因工程中应用最广泛的载体（见图1）。除标注外，图中其他英文缩写表示该质粒上不同的限制性核酸内切酶的切割位点。请分析回答：

    （1）此质粒的化学本质是           ，它可以作为多种目的基因的（运）载体，原因是           。ampr和tetr在基因工程中的主要作用是             。

    （2）人胰岛素由两条肽链共有51个氨基酸组成，如图2所示。

     

    ①通过基因工程培育能合成人胰岛素的工程菌时，可先依据             推出

                序列，再推出           序列，然后用化学方法人工合成A链和B链基因的片段。将此基因片段分别与             重组后，再导入大肠杆菌内。

    ② 在大肠杆菌内合成的单独的A、B两条多肽链没有生物活性，是因为细菌中缺少            ，不能             。若要直接获得有活性的转基因人胰岛素，可以选择              作为受体细胞。

     

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