Question

【题目】大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的___________ 到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____蛋白质。

（2）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用有 _________。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和高压蒸汽灭菌。配制伊红-美蓝培养基时，乳糖需要单独在压力为70kPa，温度为115℃灭菌20min，原因是__________。接种前通常需要检测固体培养基是否灭菌合格，检测方法是___________。

③滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_______________。

Answer 1

【答案】磷酸缓冲液 甲 鉴别 提供碳源、氮源、维生素 干热灭菌 乳糖在高温下会破坏 将未接种的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落出现 （当样品中细菌浓度低时，）培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌

【解析】

阅读题干信息可知，本题所以大肠杆菌为实验材料，考查蛋白质的提取与鉴定实验、测定自来水中大肠杆菌的数目实验，回忆和梳理相关知识点，据此答题。

（1）利用凝胶色谱法分离蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，需要加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度进行洗脱，若甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，说明甲蛋白质的相对分子质量较大。

（2）①伊红-美蓝可以将大肠杆菌染成深紫色，因此伊红-美蓝培养基属于鉴别培养基，其中蛋白胨可以为大肠杆菌提供碳源、氮源、维生素。

②微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。由于乳糖在高温下会破坏，所以在配制伊红-美蓝培养基时，乳糖需要单独在压力为70kPa，温度为115℃灭菌20min。接种前通常需要将未接种的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落出现，以检测固体培养基是否灭菌合格。

③滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌。