Question

【题目】利用单克隆抗体特异的作用于埃博拉病毒侵染蛋白（VP40蛋白）是一种战胜埃博拉病毒的有效途径。请据图回答：

（1）过程①中选用两种限制酶切割，使目的基因的两端产生不同的黏性末端，这样处理的目的是___________。

（2）图中过程②常用___________方法导入大肠杆菌。用大肠杆菌作为受体细胞的优点是_____________________（答两点即可）。

（3）在基因表达载体中，VP40蛋白基因必须插到___________，从而保证③顺利完成。

（4）为检测VP40基因是否成功表达，可以采用___________技术。

（5）④过程常用方法是___________。在大量生产单克隆抗体前，需要对杂交瘤细胞进行克隆化培养和___________以获得符合生产需求的杂交瘤细胞。用该方法生产的VP40蛋白质抗体具有___________________________________特点。

Answer 1

【答案】防止目的基因与质粒错误连接（或防止目的基因环化；或保证目的基因正确地连接到质粒上） 感受态细胞法 繁殖快，易培养 启动子和終止子之间 抗原-抗体杂交 灭活的病毒诱导 抗体检测 特异性强，灵敏度高，可大量制备

【解析】

1、在制备过程中需要将抗原首先注入生物体内，是其产生具有免疫能力的B淋巴细胞，再用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，并筛选出能大量增殖和产生特异性抗体的杂交瘤细胞，最后经过体外或体内培养，获取单克隆抗体。

2、动物细胞融合通过物理方法如离心、振动和电刺激，化学方法如聚乙二醇和生物方法如灭活的仙台病毒的诱导融合，形成杂种细胞，体现了细胞膜的结构特点具有一定的流动性。

图示①重组质粒的构建，②重组质粒导入大肠杆菌内，③产生特异性抗体，④动物细胞融合。

（1）过程①中选用两种限制酶切割，可以使目的基因的两端产生不同的黏性末端，避免目的基因环化，保证目的基因按一定方向插入到质粒中。

（2）图中过程②用感受态细胞法即Ca2+处理大肠杆菌，可以增大细胞壁的通透性，使大肠杆菌易于吸收质粒（外源DNA）（或处于感受态），提高转化效率。大肠杆菌是细菌，具有繁殖快，易培养等优点，故用大肠杆菌作为受体细胞。

（3）VP40蛋白基因必须插到启动子和终止子之间，因为基因表达载体中，VP40蛋白基因的首端必须含有启动子，启动子是RNA聚合酶结合位点，可以启动VP40蛋白基因的转录，同时终止子是转录结束的信号。

（4）检测VP40基因是否成功表达，即检测VP40基因是否控制合成VP40蛋白，可以用VP40蛋白抗体进行抗原—抗体检测。

（5）单克隆抗体制备流程:先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；通过灭活的病毒诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养。单克隆抗体技术产生的抗体具有特异性强，灵敏度高，可大量制备等特点。