Question

【题目】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力，将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。请回答：

（1）采用PCR技术可扩增干扰素基因。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、ATP、________和酶。PCR技术采用_______方法打开DNA双链。

（2）在逆转录酶的作用下，能以干扰素基因产生的mRNA作为模板按照________原则获得cDNA片段。

（3）进行转基因操作前，需用________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。

（4）基因工程常用质粒作为运载体，理由是_________________（写出3点）。

（5）将目的基因导入动物细胞最常用的方法是_________。此方法的受体细胞多是_________。

Answer 1

【答案】对干扰素基因特异性的DNA引物对 加热到90-95℃ 碱基互补配对原则 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 有多个限制酶切位点、能在受体细胞中稳定保存并复制、有标记基因 显微注射技术 受精卵

【解析】

1、PCR技术的条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

2、基因工程中最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

3、将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术，此方法的受体细胞多是受精卵。

（1）利用PCR技术可扩增干扰素基因需要有模板DNA、四种脱氧核苷酸、对干扰素基因特异性的DNA引物对、热稳定DNA聚合酶,ATP；PCR通过加热到90-95℃将DNA双链解旋。

（2）逆转录作用是以RNA为模板，在逆转录酶的催化作用，按照碱基互补配对的原则获得cDNA分子。

（3）动物细胞培养需要用胰蛋白酶时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。

（4）质粒作为运载体的条件：质粒具有能在受体细胞中稳定保存并复制、具有多个限制酶切割位点、具有标记基因等特点。

（5）将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射技术；多选择动物受精卵作为受体细胞。