Question

【生物一现代生物科技专题】科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄理科的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、sma II 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr 为抗氨苄青霉素基因），其中①——④ 是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：

（l）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶，分别对       进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为       种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体I 中含有         作为标记基因。

（3）研究人员通常采用        法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用       技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的              过程。

Answer 1

（1）含PstI、SmaI 鱼抗冻蛋白基因的DNA 、质粒（2 分）4、2 ( 2 分）

（2）抗氨节青霉素基因（ampr )

（3）农杆菌转化（或基因枪法等，答案合理即给分）抗原一抗体杂交

（4）脱分化、再分化

解析:

考查限制酶的切割和基因工程和植物组织培养等相关知识。（1）根据题中示意图可知目的基因和质粒都含有PstI和SmaI酶切位点，可以用PstI和SmaI酶进行切割目的基因和质粒，目的基因上有3个切点将形成4个DNA片段，质粒上有2个切点由于质粒为环状切割后形成2个DNA片段；

（2）对基因表达载体进行筛选时需要借助质粒上的标记基因即抗氨节青霉素基因；

（3）将目的基因导入植物受体细胞时可利用农杆菌转化法或基因枪法，在翻译水平检测是否形成相应蛋白质时，需利用抗原-抗体杂交技术；

（4）根据示意图可知③和④为植物组织培养中的脱分化和再分化过程。