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    我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。根据下图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

    （1）过程②必需的酶是    ，过程④必需的酶是     。⑤过程中为提高成功率，常用            溶液处理大肠杆菌。

    （2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共      种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是      。

    （3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Ampr、Tetr抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选     的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是      ，     。

     

    【答案】

    （1）(逆)反转录酶    DNA连接酶    CaCl2

    （2）9      1/3

    （3）含四环素抗性基因    在乙中不能存活     在丙中存活

    【解析】

    试题分析：（1）过程②为逆转录，需要逆转录酶；过程④质粒和基因连接形成重组质粒。需要DNA连接酶发挥作用；⑤过程为转化，需要CaCl2使大肠杆菌处于易于吸收外界DNA的感受态。（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3种酶分别用1,2,3表示，一种酶酶切时，一共可以得到3种不同长片段；两种酶酶切时，可得到1-2，2-1，2-3,3-2,1-3,3-1六种片段；三种酶酶切，可得到1-2,2-3,3-1三种片段，与前面重复，因此一种可形成9种片段，其中含有完整四环素抗性的有3种，单独用1酶切，单独用2酶切，1和2同时酶切得到的片段，占总数的1/3。（3）在甲中能生长的是具有四环素抗性的细菌，含有四环素抗性基因；目的基因插入氨苄青霉素基因后，破坏了该基因，使含有目的基因的大肠杆菌不能在含有氨苄青霉素的培养基上生长，但四环素基因是完好的，因此，含有目的基因的大肠杆菌能在含有四环素的培养基上生长。

    考点：本题考查基因工程的操作等知识点，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构。

     

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    科目：高中生物 来源：2014届江苏淮安清中教育集团高二下学期期末质检生物试卷（解析版） 题型：综合题

    (8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点，如图（已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因；限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）。回答问题：

    (1)过程②为　      ，质粒上的抗性基因作用是　       。

    (2)为防止④过程中出现多种重组质粒，一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，从而把目的基因和质粒各自剪切出　      (不同／相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外，还必须含有        。

    (3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种，同时对多个质粒pBR322进行切割，则形成的DNA片段共　     种；为提高⑤过程成功率，常用　     溶液处理大肠杆菌。

    (4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有　     基因，与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌　      。

     

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    科目：高中生物 来源：2014届福建泉州一中高二下期期末考试生物卷（解析版） 题型：选择题

    下列不属于基因工程药物的是(　　)

    A．从大肠杆菌体内获取的白细胞介素

    B．从酵母菌体内获取的干扰素

    C．从青霉菌体内获取的青霉素

    D．从大肠杆菌体内获取的胰岛素

     

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    科目：高中生物 来源：2009—2010学年度下学期湖北省高一期末测试生物试题 题型：选择题

    基因工程育种的原理和生殖方式是                                 （   ）

    A．基因重组无性生殖

    B．基因突变无性生殖

    C．染色体变异有性生殖

    D．染色体变异无性生殖

     

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

    （1）过程②必需的酶是________________ ，过程④必需的酶是________________。⑤过程中为提高成功率，常用________________溶液处理大肠杆菌。

    （2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共________________ 种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是________________ 。

    （3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Ampr、Tetr抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选________________ 的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态是________________ 。

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