Question

38.【生物—生物技术实践】（本题共15分）

某中学杨老师自制大蒜提取液，希望这种简便、经济的提取液能够高效的杀灭餐具上的细菌，杨老师完成了下面的探究实验：

（1）制作提取液：杨老师将大蒜榨汁后制成提取液，具体做法如下表所示。请根据表中数据，在表中的括号内填出1#提取液应加入的冷开水量：

大蒜提取液编号	1#	2#
大蒜（g）	350	350
冷开水（mL）	（   ）	880
无色食醋（mL）	/	20

（2）使用方法：将餐具浸泡在提取液中10min后取出冲洗。

（3）样品抽取：将经过         处理的滤纸贴在餐具表面1min，然后再将滤纸放到50ml无菌水中，充分振荡后制成原液。再取1ml原液加入    ml无菌水中摇匀制成10倍稀释液。

（4）分离及培养：用       分离法分离细菌。分别取1ml原液和10倍稀释液，分别加到伊红-美蓝培养基中，用灭菌、消毒后的          （用具），将原液和稀释液均匀涂布到整个平板上。每个浓度各做三个培养皿，其目的是                    。本实验另设1ml无菌水涂布在未接种的培养皿为空白对照，原因是排除           。最后在37℃培养48h。

（5）观察记录：在下面的空白处，设计1#提取液实验组的观察记录表：（2分）

（6）结果分析：统计数据，得到消毒前后的菌落总数变化（单位cfu/cm²，每平方厘米样品中含有的细菌群落总数）（每空2分）

		总份数	＜1	1-10	10-102	102-103	103-104	＞104
1#提取液	消毒前	30	0	0	0	3	18	9
	消毒后	30	14	12	4	0	0	0
2#提取液	消毒前	33	2	0	0	3	12	16
	消毒后	33	19	10	4	0	0	0

根据消毒前后的数据可知：                               

2#提取液效果高于1#，分析可能的原因：                                      。

请你给杨老师提出需要进一步研究的问题：                                   。

Answer 1

【答案】（1）900        （3）灭菌；9ml

（4）涂布分离（稀释涂布平板）（只写“涂布”不得分） 玻璃刮刀（三角刮刀、涂布器）；重复实验，减小实验误差；灭菌不彻底对本实验的影响

（5）(原液、稀释液1分；平均值1分) （2分）

	菌  落  数
	1号培养皿	2号培养皿	3号培养皿	平均值
原  液
10-1稀释液

（6）（每空2分）大蒜提取液能够高效杀菌；无色食醋促使大蒜提取液成微酸性，协同杀菌

（如：①进一步探究同等条件下，醋和蒜汁哪种消毒作用更好？②不同浓度的大蒜汁,哪种消毒效果更好？③醋作用的最适PH？）

【解析】1#与2#只有一个变量不同，即无色食醋，其余的量都应该是相同的。将滤纸无菌处理，可避免滤纸上所带细菌对实验结果的影响。要制成10倍稀释液，因此1ml原液加入9ml无菌水。分离细菌多用涂布分离(稀释涂布平板法)分离，用灭菌、消毒后的玻璃刮刀（三角刮刀、涂布器），将原液和稀释液均匀涂布到整个平板上，每个浓度多做几组实验以减少误差。本实验另设1ml无菌水涂布在未接种的培养皿为空白对照，以排除灭菌不彻底对本实验的影响。由图中数据可以看出大蒜提取液能够高效杀菌，而且有无色食醋的情况下，杀菌效果更好。本实验只探究了醋和蒜汁的有无对杀菌效果的影响，没有考虑浓度、PH值等的影响，这可以做为下一步的探究方向。