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    6．pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3 666bp（bp表示碱基对），其结构如下图所示．图中PRPL是启动子，rrnB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ等为各种限制性内切酶．请据图回答下列有关问题：
    （1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有多个限制性内切酶的切割位点、标记基因．
    （2）该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割．单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2 666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3 166bp片段．若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为750bp，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为500bp、1000bp．
    （3）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是保证目的基因的高水平表达（高效转录）．温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活．促进工程菌目的基因表达的诱导温度为42℃．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有具有多个限制性内切酶的切割位点（便于目的基因的插入）、标记基因（便于鉴定和筛选含有目的基因的受体细胞）．
    （2）单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段，这说明该质粒上有一个A酶切割位点、一个B酶切割位点、2个C酶切割位点．A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，说明A和C酶的一个切点之间的长度为500bp，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段，说明B和C酶的一个切点之间的长度为250bp，若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为500+250=750bp，C的两个切割位点与A点的最距离分别为500bp、1000bp．
    （3）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是保证目的基因的高水平表达（高效转录）．温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活，因此要促进工程菌目的基因表达就要使CIts蛋白失活，即促进工程菌目的基因表达的诱导温度为42℃．
    故答案为：
     （1）多个限制性内切酶的切割位点　标记基因
    （2）750 bp　500 bp　1 000 bp
    （3）保证目的基因的高水平表达（高效转录）      　42℃

    点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤及相关细节，能结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    19．人体红细胞的生成过程如图所示．幼红细胞早、中期有分裂能力，晚期脱去细胞核．血红蛋白自原红细胞开始合成，在网织红细胞中合成最旺盛．下列叙述正确的是（　　）
    造血干细胞→红系祖细胞→原红细胞→幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞．
    A．造血干细胞到成熟红细胞的分化是从原红细胞开始的
    B．原红细胞分裂时没有同源染色体的联会和分离
    C．网织红细胞中不能进行遗传信息的转录和翻译
    D．红系祖细胞与成熟红细胞所含DNA相同，蛋白质不同

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    17．在研究人类某种遗传病时，发现必须同时具有A、B两种显性基因的人表现型才能够正常（已知两对等位基因位于两对常染色体上）．
    （1）该遗传病患者的基因型有5种．
    （2）如图是该病的某遗传系谱图．
    已知I-1基因型为AaBB，I-3基因型为AABb，且II-2与II-3婚配后所生后代不会患该种遗传病，则II-2与II-3的基因型分别是aaBB、AAbb．
    （3）Ⅲ-1与一正常男性婚配并生育了一个正常孩子，现已怀了第二胎，有（填“有”或“没有”）必要对这个胎儿针对该疾病进行基因诊断，理由是与之婚配的正常男性可能具有致病基因，该胎儿有患该疾病的可能．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    14．表中数据为实验测得体外培养的某动物细胞的细胞周期各阶段的时间（单位：小时），其中G1、S、G2组成了分裂间期，S为DNA复制期，分裂期M包括前、中、后、末4个时期；如图表示处于一个细胞周期中各个时期细胞数目的变化．请据图回答下列问题：
    周期G1SG2M合计
    时长（h）1073.51.522
    （1）图中2N和4N两种DNA含量的细胞所处的时期分别为表格中的G1、G2+M时间段（用表格中的字母表示）．
    （2）若在上述细胞的培养液中加入过量的DNA合成抑制剂，处于表格中S期的细胞立刻被抑制，再培养15小时，则其余细胞都将被抑制在G1～S期交界处；去除抑制剂，更换新鲜培养液，细胞将沿细胞周期继续运行，在所有细胞达到G1期终点前，再加入DNA合成抑制剂，则全部细胞都被阻断在G1～S期交界处，实现细胞周期同步化．
    （3）S期的启动需要一种蛋白质分子作为启动信号，这种蛋白质在S期之前合成并存在于S期全过程中．若将S期和G1期细胞融合，则G1期细胞核进入S期的时间将提前．（答“提前”、“不变”或“推迟”）
    （4）在电镜下观察处于M期的细胞，可见纺锤体是由中心体发出的星射线组成的．在M期中消失又出现的细胞结构是核膜、核仁．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    1．下列关于生物多样性及全球性生态环境问题的说法中，正确的是（　　）
    A．自然保护区有丰富的动植物资源，这里所有生物构成了生物多样性
    B．将受灾地的珍稀动物迁入自然保护区加以保护是保护生物多样性的最有效的措施
    C．全球性生态环境问题主要包括全球气候变暖、水资源短缺、土地荒漠化和生物多样性锐减等
    D．具有食用、药用和工业原料等以及对生态系统的重要调节功能属于生物多样性的直接价值

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    11．通过胚胎移植技术，可以实现良种牛的快速繁殖．下列相关叙述正确的是（　　）
    A．对供体和受体母牛都要进行相同激素处理
    B．受精和胚胎的早期培养都需要在体外进行
    C．对冲卵获得的原肠胚检查合格后方可移植
    D．胚胎分割移植实现同卵多胎的成功率随着胚胎数目的增多而降低

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    18．某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动．具体步骤如下：
    材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10g．剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于-20℃条件下保存24h．
    DNA粗提取：
    步骤一：将上述材料分别放入研钵中，各加入15mL研磨液（含洗涤剂和食盐），充分研磨．用两层纱布过滤，取滤液备用．
    步骤二：先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液，再加入20mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上．
    步骤三：取6支试管，分别加入等量的2mol/LNaCl（填溶液名称及浓度）溶液溶解上述絮状物．
    步骤四：：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂．混合均匀后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如表：
    材料保存温度花菜辣椒蒜黄
    20℃++++++
    -20℃+++++++++
    （注：“+”越多表示蓝色越深）
    分析上述实验过程，回答下列问题：
    （1）该探究性实验课题名称是探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响．
    （2）步骤一中研磨液中洗涤剂的作用是溶解细胞膜，食盐的作用是溶解DNA．
    （3）步骤二中“缓缓地”搅拌，这是为了减少（或防止）DNA断裂，所加酒精溶液需冷却的原因之一是低温抑制DNA水解酶（或核酸水解酶或DNA酶）的活性，可以防止DNA降解．
    （4）上述实验中步骤三，步骤四的空缺依次分别为2mol/LNaCl、二苯胺．
    （5）实验表明，保存在-20℃的蒜黄获取的DNA量最多．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    15．2013年，比利时消费者协会对当地的肉食进行微生物抽样检测，结果表明73%的禽肉、16%的猪肉和8%的牛肉含有超级细菌．专家甚至发现一些细菌已经进化到可以分泌超广谱酶用来水解多种抗生素．下列相关分析正确的是（　　）
    A．超级细菌的产生是因为人类在养殖业中滥用抗生素，诱导细菌发生了抗药性的变异
    B．超级细菌具有抵抗多种抗生素的能力，在自然选择中比普通细菌有更强的生活力
    C．超级细菌的后代都具有抗抗生素的能力，使得细菌种群中抗抗生素基因频率升高
    D．超级细菌和普通细菌之间不存在生殖隔离，因此不是新的物种

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    14．图是科学家对大肠杆菌DNA进行改造及对改造后的DNA分子遗传信息传递的示意图．由图可推测出（　　）
    A．经DNA分子改造所产生变异的来源属于基因突变
    B．改造后的DNA分子中含有61种密码子
    C．碱基X、Y中含有C、H、O、N、P等5种元素，二者通过氢键相连
    D．大肠杆菌中一个mRNA分子只能结合一个核糖体，进行多肽链合成

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