Question

【题目】在盛产柿子的某地，生物小组开展柿子酒、柿子醋生产的相关活动．
（1）土壤中的酵母菌计数：
在秋季的柿子园中，落地的柿子流出果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖．
①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在旁称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．而后进行系列稀释操作；吸取锥形瓶中土壤液的上清液mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至101、102、103、104倍的土壤液的稀释液．
②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的102、103、104倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作．在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如表）．

序号	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀释度104倍	5	8	3
稀释度103倍	178	191	156
稀释度102倍	418	511	389

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为个．要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是 ．
（2）柿子醋生产菌的制备：
为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布．应从（填“甲”“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种．

（3）柿子酒、柿子醋的制作（发酵装置如图2所示）：

①排气口弯管设置的目的是 ．
②可通过装置中的对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较 ．
③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变进行生产．

Answer 1

【答案】
（1）火焰②,1,1.75×107,同时在各稀释度组中,另加一个平板接种无菌水作为对照
（2）30?35,丙
（3）在酒精发酵时用来排出C02,防止空气中微生物的污染,出料口,多,菌种和环境条件
【解析】解：（1）①为了避免微生物的污染，用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在火焰旁称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．而后进行系列稀释操作：吸取锥形瓶中土壤液的上清液1mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至101、102、103、104倍的土壤液的稀释液．

②由于一般选择菌落数在30﹣300的平板进行计数，因此选择“稀释度103倍”进行计算，每克土壤样品中的酵母菌数量约=（178+191+156）÷3÷0.1×103×102÷10=1.75×107个．要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照．（2）酵母菌适宜生存的温度为18～25℃，为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜（醋酸菌）于3035℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布．丙中已形成单个菌落，因此需要从丙区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种．（3）①排气口弯管设置的目的是在酒精发酵时用来排出C02，防止空气中微生物的污染．

②可通过装置中的出料口对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较多．

③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变菌种和环境条件进行生产，即菌种由酵母菌改为醋酸菌，环境条件有无氧、18～25℃改为通入氧气、30～35℃．

所以答案是：（1）①火焰 1 ②1.75×107 同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照（2）3035 丙（3）①在酒精发酵时用来排出C02，防止空气中微生物的污染

②出料口多 ③菌种和环境条件