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    4．（1）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列．
    （2）如图1所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明．
    （3）酶M特异性剪切的DNA片段是，则酶N特异性剪切的DNA片段是．
    （4）多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种．
    （5）如图2的A和B分别表示两段DNA序列．表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点．
    酶的种类1234
    酶切位点
    （6）据图2：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图2中A所示，则应选择表格中酶2进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图2中A和B所示，则应选择表中酶2和3进行酶切．
    （7）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2中B所示，请在图3方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列．
    ．

    分析 分析：切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列；依据图M信息及题干相应文字信息，可推出片段甲、乙、丙均有酶1切割形成，所以片段丁、戊是由酶2切割形成的，则酶N特异性剪切的DNA片段是；多个片段乙和多个片段丁混合，用DNA连接酶连接可形成乙乙、乙丁、丁丁三种连接方式（只考虑两个DNA片段连接）；利用表格信息及限制性酶完成（6）（7）．

    解答 解答：（1）切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列；
    （2）依据图M信息及题干相应文字信息，可推出片段甲、乙、丙均有酶1切割形成，所以片段丁、戊是由酶2切割形成的，则酶N特异性剪切的DNA片段是；
    （3）多个片段甲和多个片段乙混合，用DNA连接酶连接可形成乙乙、乙丁、丁丁三种连接方式（只考虑两个DNA片段连接），所以其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种；
    （6）利用表格信息及限制性酶2和限制酶3的酶切位点可推知假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图2中A所示，则应选择表格中酶2进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图2中A和B所示，则应选择表中酶2和3进行酶切．
    （7）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2中B所示，经酶切后产生的两个末端的碱基序列．
    故答案为：
    （1）一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
    （3）
    （4）3
    （6）2     2和3
    （7）

    点评 本题考查基因工程，理解限制酶的作用特点是解题的关键，同时要求学生具备分析图形的能力．

    练习册系列答案
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