Question

【题目】苯酚是染料、农药和医药等行业的重要生产原料和中间体，是工业废水的常见污染物之一。某研究小组为了处理高浓度含苯酚废水，从处理废水的活性污泥中分离筛选得到能高效降解 苯酚的细菌，如图为实验过程部分图示。

（1）实验用的培养基和培养皿采用的灭菌方法是__ ；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该___________。

（2）为了筛选降解苯酚的细菌，本实验所选用的培养基必须以__________________________________ 为唯一碳源。从上图分析本实验选用________获得降解苯酚的单菌落。

（3）分离纯化得到能高效降解苯酚的细菌，应对其进行________ 培养，培养后若要测定培养液中该菌的数目，可在显微镜下用___ 直接计数，该方法的测量值比活菌的实际数目_______ 。最后应将菌种划线接种在斜面上，37℃培养 24h 后，置于_______ 保存。

Answer 1

【答案】高压蒸汽灭菌 用牛皮纸（或报纸）包扎器皿 苯酚 涂布分离法 （稀释涂布法） 扩大 血细胞计数板 大 4℃冰箱

【解析】

1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH

、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。

2、两种纯化细菌的方法的比较

	优点	缺点	适用范围
平板划线分离法	可以观察菌落特征，对混合菌进行分离	不能计数	适用于好氧菌
稀释涂布平板法	可以计数，可以观察菌落特征	吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延	适用于厌氧，兼性厌氧菌

3、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

（1）实验用的培养基和培养皿采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该用牛皮纸（或报纸）包扎器皿。

（2）为了筛选降解苯酚的细菌，本实验所选用的培养基必须以苯酚为唯一碳源。从上图分析本实验选用涂布分离法（稀释涂布法）获得降解苯酚的单菌落。

（3）分离纯化得到能高效降解苯酚的细菌，应对其进行扩大培养，培养后若要测定培养液中该菌的数目，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，该方法会把死菌计入在内，故其测量值比活菌的实际数目大。最后应将菌种划线接种在斜面上，37℃培养 24h 后，置于4℃冰箱保存。