Question

【题目】下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据图回答相关问题：

（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用________________________的培养基进行分离，并加入________指示剂进行鉴别。

（2）若取土样5g，应加入____________ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液，分别吸取0.1mL的稀释液涂布到固体培养基上，这种接种方法称为________________。某同学用该方法接种后，在某个平板上没有得到菌落，可能的原因是_______________________________________

（3）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计符合要求的菌落数，结果如下表，其中_______________倍的稀释比较合适。

稀释倍数	103	104	105	106	107
菌落数	>500	367	248	36	18

（4）若需要将分离的菌种进行长期保藏，应使用的方法是_______________________。

Answer 1

【答案】 以尿素为唯一氮源 酚红 45 稀释涂布平板法 涂布器灼烧后未冷却就用于涂布，杀死了菌种 105和106 甘油管藏的方法

【解析】试题分析：本题考查微生物的分离、计数，考查土壤中分解尿素细菌分离原理、方法的理解和应用。

（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的培养基进行分离，并加入酚红指示剂进行鉴别。尿素分解产生的NH3使指示剂表现为红色。

（2）取土样5g，制成稀释10倍土壤溶液，应加入45ml的无菌水配。分离细菌并计数，应使用稀释涂布平板法。用该方法接种后，在某个平板上没有得到菌落，可能的原因是涂布器灼烧后未冷却就用于涂布，杀死了菌种。

（3）菌落数在30～300之间的平板符合技术要求，据表可知，105和106倍的稀释比较合适。

（4）长期保藏分离的菌种，应使用甘油管藏的方法。