(6分)科研人员为探究诱导酵母原生质体摄取蚕豆叶绿体的适宜条件，进行了如下实验。

① 提取蚕豆叶绿体：过滤蚕豆新鲜叶片研磨液，对滤液进行_A_后获得叶绿体，加入2 mL 0.35 mol·L^－¹氯化钠溶液，制成悬浮液。

② 制备酵母原生质体：在适宜条件下用2%的蜗牛酶处理酵母菌，获得酵母原生质体。

③ 诱导酵母原生质体摄取蚕豆叶绿体：将酵母原生质体与蚕豆叶绿体混和后，在不同温度和pH下用聚乙二醇(PEG)处理60 min后洗涤。用显微镜观察，结果如下表：

实验组别	温度	pH	酵母原生质体数/mL	含叶绿体的酵母原生质体数/mL
1	30℃	7.6	760	4
2	37℃	7.6	1 100	7
3	37℃	6.0	1 250	5
4	37℃	10.2	990	3

请回答：

(1)补全实验步骤：A ________________________。

(2)步骤①中加入0.35 mol·L^－¹氯化钠的作用是________________________。

(3)步骤②中蜗牛酶的作用是除去酵母细胞的________________。

(4)实验结果表明酵母原生质体摄取蚕豆叶绿体较适宜条件是________________。在适宜温度下，酵母原生质体容易摄入叶绿体与细胞膜的______________增强有关。

【答案】

(6分)(1)(差速)离心　 (2)维持叶绿体的正常形态(防止叶绿体吸水胀破)

(3)细胞壁 (4)温度为37℃，pH为7.6(2分)　流动性

【解析】

试题分析：

解析：（1）由于酵母原生质体失去了细胞壁的保护而容易吸水胀破，因此，需要选择等渗（或略高渗）溶液（0.35mol/L NaCl溶液）保存原生质体，以保持原生质体的正常形态和活性。（2）当酵母原生质体成功摄取叶绿体后，可以在光学显微镜下观察到原生质体中有绿色颗粒（叶绿体）。（3）叶绿体是光合作用的场所，若叶绿体能在酵母原生质体中正常代谢，则该酵母原生质体就可能会由原先的异养转变为自养，最终培育的酵母细胞就可因能自养而独立生活。

评讲中还可进行适当延伸，如当酵母原生质体成功摄取叶绿体后，酵母原生质体长出新细胞壁的时期、如何确定叶绿体能否在酵母菌细胞中长期存在并传递给后代等，以拓展学生的思维。

考点：本题以“酵母原生质体摄取叶绿体的条件研究”为背景，考查原生质体及叶绿体的制备方法、诱导生物膜融合的方法及原理，以及相关实验分析能力。

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5	黑暗（一侧贴含10^－⁶mol/L的生长素琼脂块）	？