Question

【题目】为了增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与转运肽基因相连，一起导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用__________法快速扩增从陆地棉基因文库中获取到的酶D基因和从拟南芥基因文库中获取到的转运肽基因。所含三种限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切点如图所示，则用______酶处理两个基因后，可得到______端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的T—DNA中，构建_________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含__________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是____________，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过__________技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用________法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

Answer 1

【答案】 PCR ClaⅠ和DNA连接 A和 D 基因表达载体（或“重组质粒”） 四环素 利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 植物组织培养 抗原-抗体杂交

【解析】试题分析：基因文库包括cDNA文库、基因组文库等，某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库，而用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段属于cDNA文库。限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。同种限制酶切割能够产生相同的黏性末端，便于质粒和目的基因连接。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用抗原-抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。