Question

【题目】【生物一选修3:现代生物科技】为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，然后利用_____________技术分别进行扩增。

（2）选用下图中的限制酶________处理两个基因后再用__________酶处理，得到_______（填图中字母）端相连的融合基因。

（3）将上述融合基因插人上图所示Ti质粒的T一DNA中，构建_____________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，得到用于转化的浸染液。剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间，此过程的目的是 ，进一步培养筛选后获得转基因油菜。

（4）用DNA—RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了_______________ 过程。

Answer 1

【答案】（15分，除标注外每空2分）（1）PCR（多聚酶链式反应）（1分）

（2）ClaI DNA 连接 A、D

（3）基因表达载体 四环素 将融合基因导人油菜叶片细胞并插入到其染色体DNA上

（4）转录

【解析】（1）依题意可知：酶D基因与转运肽基因都属于目的基因，扩增目的基因，可利用PCR（多聚酶链式反应）技术。

（2）酶D基因的A端与转运肽基因的D端均含有ClaI的识别位点，因此可选用ClaⅠ限制酶处理两个基因后获得相同的粘性末端，再用DNA连接酶处理，得到A、D端相连的融合基因 。

（3）将上述融合基因插入上图所示Ti质粒的T—DNA中，构建基因表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。因用于构建基因表达载体的Ti质粒上有四环素抗性基因，所以成功导入基因表达载体的农杆菌可在含有四环素的培养基上生长，为将其筛选出来，可将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落。剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞并插入到其染色体DNA上，进一步筛选后获得转基因油菜。

（4）确定融合基因是否完成了转录过程，可采用DNA—RNA分子杂交技术。