Question

【题目】以下是基因工程四个主要操作步骤：①基因表达载体的构建；②将目的基因导入受体细胞；③目的基因的获取；④目的基因的检测与鉴定。请分析回答相关问题：

(1)基因工程操作的正确步骤是 ____（填数字）。

(2)进行③操作时，可以从基因文库中获取，基因文库分为基因组文库和______两种，其区别是______；PCR扩增也是获取目的基因常用的方法，进行PCR时，需要向扩增仪中加入热稳定DNA聚合酶、四种原料、_____以及引物，合成引物的前提是____。

(3)进行操作①时，应先选择合适的载体，常见的载体是质粒，质粒的本质是_______；右图是常用的pBR322质粒载体，该质粒含有抗氨苄西林基因(Ampt)和抗四环素基因(Tetr)，两个抗性基因中均具有限制酶酶切位点。若用限制酶Psl I切割并构建好表达载体，后将构建好的表达载体导入受体菌中，若受体菌_____，则说明目的基因插入到了pBR322载体中。若受体菌____，则说明目的基因没有插入到pBR322载体中。

Answer 1

【答案】 ③①②④ 部分基因文库 基因组文库包含一种生物的全部基因而部分基因分库只包含该种生物的部分基因 模板DNA 有一段已知的目的基因核苷酸序列 双链环状DNA分子 只有抗四环素性状 既有抗氨苄西林性状也有抗四环素性状

【解析】试题基因工程的基本操作步骤：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。

（1）根据前面的分析可知，基因工程步骤的操作顺序是③①②④。

（2）基因文库分为基因组文库和部分基因文库两种，其区别在于前者包含一种生物的全部基因，而后者只包含该种生物的部分基因；进行PCR扩增时，需要四个基本条件是热稳定DNA聚合酶、四种原料、模板DNA以及引物，其中合成引物的前提是有一段已知的目的基因核苷酸序列。

（3）质粒是基因工程中最常用的载体，其实质是小型环状DNA，如题图中pBR322质粒。由于该质粒中含有抗氨苄西林基因(Ampt)和抗四环素基因(Tetr)两个标记基因，其中Ampt中含有限制酶Psl I切割位点，如果用Psl I切割目的基因和该质粒，让它们连接形成重组质粒，则该重组质粒只含1种完整的Tetr的标记基因，所以导入了该重组质粒的受体菌只能抗四环素，不能抗氨苄西林。即是说，受体菌中导入了该重组质粒，则受体菌只出现抗四环素的性状；若受体菌出现既抗四环素性状，又抗氨苄西林性状，则说明导入的不是重组质粒，而是不含目的基因的正常质粒。