Question

5．下面是生物研究小组对4 种不同品牌腐乳产蛋白酶菌株进行筛选的方案，请协助完成方案，并回答有关问题：
【实验原理】在固体培养基中加入溶解性差、但可被微生物利用的酪蛋白可以形成浑浊、不透明的培养基背景．当培养基中的酪蛋白被微生物分泌的蛋白酶分解后，在菌落（沉淀圈）的周围就会形成透明圈（如图1）．透明圈的大小反映了菌落利用蛋白质的能力．

【材料与试剂】4种品牌的豆腐乳（编号品牌1、2、3、4）
【主要仪器与设备】恒温水浴锅、培养箱、高压灭菌锅等
【实验方法】
Ⅰ、制备固体平板培养基：计算→称量→溶化→调pH→灭菌→倒平板．
Ⅱ、运用稀释涂布平板法分离纯化菌株：分别梯度稀释制备4种腐乳的菌悬液，吸取少量的菌悬液，注入培养基平板中，涂布均匀．然后置于温度28℃的恒温箱中，培养36h．
Ⅲ、初筛菌种：从上一步培养基平板上挑选单细胞菌落，分别接种于筛选培养基中，在28℃下培养48h．挑选透明圈大而沉淀圈小的菌株，作为初筛菌株．
回答下列问题：
（1）补全“制备微生物固体培养基”的主要操作步骤①灭菌，②倒平板．
（2）“菌落”在生态学上属于种群层次的生命系统，“稀释涂布平板法”纯化菌种的原理是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能够在培养基表面形成单个的菌落．在进行菌种纯化时，还可以采用平板划线法进行．
（3）初筛菌株的菌落周围“透明圈大”说明沉淀圈中的微生物分泌的蛋白酶活性越高．
（4）研究人员将初筛菌株接种于发酵液中，在适宜条件下培养，并每隔一定时间取样检测发酵液中蛋白酶的活性，结果如图2：
根据曲线可知，在培养的早期，各品牌菌种发酵液中蛋白酶活性都迅速升高，这可能与时间有关，研究中最好选择哪一品牌的菌种作为高产蛋白酶的菌株品牌1．

Answer 1

分析 培养基的制作流程一般为：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节PH→分装→灭菌→倒平板→（冷却后）倒置平板；
淀粉分解菌可以产生淀粉酶，在鉴别培养基上，淀粉分解菌的菌落周围形成透明圈，一定范围内淀粉酶越多，活性越高，透明圈越大，对菌株生存越有利．

解答 解：（1）制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
（2）“一个菌落”是同种细菌的群体，在生态学中属于一个种群．稀释涂布平板法依据的原理是在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的菌种分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落．在进行菌种纯化时，还可以采用平板划线法进行．
（3）淀粉分解菌可以产生淀粉酶，在鉴别培养基上，淀粉分解菌的菌落周围形成透明圈，一定范围内淀粉酶越多，活性越高，透明圈越大，对菌株生存越有利．
（4）图中四个品牌，随着时间的推移，活性迅速增加，最终品牌1稳定在较高的水平上．
故答案为：
（1）灭菌   倒平板
（2）种群  单个细胞  平板划线
（3）越高
（4）时间   品牌1

点评 本题主要考查微生物的类群和微生物培养等知识，重点考查学生的实验分析能力，难度适中．