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    9．线粒体是与细胞凋亡密切相关的细胞器．为研究蛋白B对家蚕细胞凋亡的影响，科研人员做了如下实验．
    （1）细胞色素c是线粒体内膜上的重要电子传递体，参与有氧呼吸第三阶段的生化反应．细胞受到凋亡信号的作用后，线粒体膜上的非特异性通道打开，引起线粒体膜的（离子）通透性发生改变，线粒体膜两侧离子（和质子）的分布发生变化，导致线粒体膜电位下降或消失，使得细胞色素c 释放出来，引发细胞凋亡．
    （2）用生物碱H处理悬浮培养的家蚕细胞，处理不同时间后，用凝胶电泳方法测定细胞溶胶（细胞质基质）中细胞色素c的含量，结果如图所示．

    ①由于细胞中微管蛋白的表达量相对稳定（且丰富），在实验中可作为标准物质，以校准和消除由于细胞培养操作、细胞取样量和细胞色素c的检测方法等无关变量对实验结果的影响．
    ②据图分析，正常细胞的细胞溶胶中没有（或“未能”）检测到细胞色素c，由细胞溶胶中细胞色素c含量增加，分离的线粒体中细胞色素c含量下降判断，随着生物碱H 处理时间延长，细胞色素c逐渐释放到细胞溶胶中．
    （3）为研究蛋白B的功能，科研人员构建蛋白B基因过量表达载体和蛋白B基因表达干扰载体，导人悬浮培养的家蚕细胞中，用生物碱H处理转基因家蚕细胞，检测到过量表达蛋白B的细胞溶胶中细胞色素c的释放量减少，抑制蛋白B基因表达的细胞溶胶中细胞色素c的释放量显著增加，推测蛋白B抑制细胞色素c的释放，进而抑制细胞凋亡．

    分析 1、有氧呼吸的过程中，催化[H]氧化为H2O的过程是有氧呼吸的第三阶段，其场所是线粒体内膜．
    2、变量：实验过程中可以变化的因素称为变量，包括自变量、因变量和无关变量；自变量是想研究且可人为改变的变量称为自变量；因变量是随着自变量的变化而变化的变量称为因变量； 无关变量是在实验中，除了自变量外，实验过程中存在一些可变因素，能对实验结果造成影响，这些变量称为无关变量．
    3、基因工程的基本操作步骤主要包括目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定四步．

    解答 解：（1）有氧呼吸第三阶段的场所是线粒体内膜，由细胞色素c是线粒体内膜上的重要电子传递体，可推测细胞色素c参与有氧呼吸第三阶段的生化反应；细胞受到凋亡信号的作用后，线粒体膜上的非特异性通道打开，会引起线粒体膜的（离子）通透性发生改变，线粒体膜两侧离子（和质子）的分布发生变化，导致线粒体膜电位下降或消失，使得细胞色素c 释放出来，引发细胞凋亡．
    （2）①在用生物碱H处理悬浮培养的家蚕细胞，处理不同时间后，用凝胶电泳方法测定细胞溶胶（细胞质基质）中细胞色素c的含量的实验中，由于细胞中微管蛋白的表达量相对稳定（且丰富），所以在实验中可作为标准物质，以校准和消除由于细胞培养操作、细胞取样量和细胞色素c的检测方法等无关变量对实验结果的影响．
    ②分析题图可知，正常细胞的细胞溶胶中没有（或“未能”）检测到细胞色素c，而据细胞溶胶中细胞色素c含量增加，分离的线粒体中细胞色素c含量下降可判断，随着生物碱H处理时间延长，细胞色素c逐渐释放到细胞溶胶中．
    （3）为研究蛋白B的功能，科研人员构建蛋白B基因过量表达载体和蛋白B基因表达干扰载体，导人悬浮培养的家蚕细胞中，用生物碱H处理转基因家蚕细胞，检测到过量表达蛋白B的细胞溶胶中细胞色素c的释放量减少，而抑制蛋白B基因表达的细胞溶胶中细胞色素c的释放量会显著增加，据此可推测蛋白B抑制细胞色素c的释放，进而抑制细胞凋亡．
    故答案为：
    （1）三    （离子）通透    离子（和质子）
    （2）①相对稳定（且丰富）    检测方法   
    ②没有（或“未能”）    细胞溶胶中细胞色素c含量增加，分离的线粒体中细胞色素c含量下降
    （3）生物碱H    抑制细胞色素c的释放，进而抑制细胞凋亡

    点评 本题以为了研究蛋白B对家蚕细胞凋亡的影响，科研人员所作的实验为题材，考查细胞结构和功能、基因工程操作步骤等知识，考生识记细胞结构和功能、明确基因工程的操作步骤是解题的关键．

    练习册系列答案
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