Question

3．科学家将拟南芥的抗寒基因（CBFl），转入香蕉以获得抗寒的香蕉品种．如图是某质粒载体上的Aac I、Xba I、EcoR I、Hind III四种限制酶的切割位点示意图．
据图回答问题：
（1）在该实验中为构建基因表达载体，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，对质粒载体进行切割的限制酶是SacI、XbaI，理由是用相同限制酶切割来源不同的DNA后，可产生相同的末端．
（2）连接CBFl基因到该质粒载体后，作为基因表达载体的组成还必须有启动子和终止子．将重组质粒导入香蕉细胞最用的方法是农杆菌转化法．
（3）为了鉴别受体细胞中是否含有CBFl基因，可用含氨苄青霉素的培养基进行筛选．
（4）科学家将生长健壮、苗龄一次的转基因香蕉（实验组）与非转基因香蕉（对照组）进行低温处理，鉴定两组之间的抗寒性差异，如果实验组的抗寒能力明显高于对照组，则说明获得了抗寒的香蕉优质品种．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）构建基因表达载体时，应该用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，因此为构建基因表达载体，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，对质粒载体进行切割的限制酶也是Sac I、Xba I，这样可以产生相应的黏性末端，便于DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．
（2）因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因、标记基因等；将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法．
（3）根据运载体上的标记基因（氨苄青霉素抗性基因）可知，鉴别受体细胞中是否含有CBFl基因可用含氨苄青霉素的培养基进行筛选．
（4）转基因香蕉能抗寒，因此将生长健壮、苗龄一次的转基因香蕉（实验组）与非转基因香蕉（对照组）进行低温处理，鉴定两组之间的抗寒性差异，如果实验组的抗寒能力明显高于对照组，则说明获得了抗寒的香蕉优质品种．
故答案为：
（1）Sac I、Xba I     用相同限制酶切割来源不同的DNA后，可产生相同的末端
（2）启动子和终止子    农杆菌转化法
（3）氨苄青霉素
（4）低温     实验组的抗寒能力明显高于对照组

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、概念、操作步骤等，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．