Question

【题目】蛋白酶在全球酶制剂市场中销售额达到60%以上，应用非常广泛。许多细菌和霉菌都能产生胞外蛋白酶。芽孢杆菌是一类具有较高的产生蛋白酶能力的细菌，其芽孢休眠体对高温和很多有毒化学物质都有很强的抗性。在一定条件下，从土壤中筛选高产蛋白酶芽孢杆菌的步骤如下：

（1）将土壤悬液置于75～80℃恒温水浴中处理15min的目的是_________________________。

（2）牛奶培养基成分为：牛肉膏、蛋白胨、脱脂奶粉、NaCl、琼脂、水，其中提供氮源的是_________，用_________法将微生物接种到该培养基表面。

（3）从牛奶培养基上如何挑选出蛋白酶高产菌株?___________________________，这样挑选的理由是_________________________________________________。

（4）根据相对分子质量的大小纯化发酵后获得的蛋白酶的有效方法是___________________。

（5）蛋白酶在加酶洗衣粉中应用最广泛、效果最明显的是_____________________。

Answer 1

【答案】杀死非芽孢细菌及其他微生物 牛肉膏、蛋白胨、脱脂奶粉 稀释涂布平板（或平板划线） 挑选无色透明圈大的菌落 牛奶中蛋白质被蛋白酶水解后，会形成以蛋白酶产生菌为中心的无色透明圈，且蛋白酶高产菌株水解蛋白质能力更强，透明圈会更大 凝胶色谱法（或者分配色谱法） 碱性蛋白酶

【解析】

微生物的研究通常包含微生物的获得、分离纯化、培养以及保存等。微生物分离的基本步骤为配制培养基、接种、培养筛选等。微生物的实验室培养，常用到培养基，培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。

（1）将土壤悬液置于75～80℃恒温水浴中处理15min能杀死非芽孢细菌及其他微生物。

（2）作为构成生物体的蛋白质、核酸及其他氮素化合物的材料。把从外界吸入的氮素化合物或氮气，称为该生物的氮源。牛奶培养基成分为：牛肉膏、蛋白胨、脱脂奶粉、NaCl、琼脂、水，其中提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨、脱脂奶粉。用稀释涂布平板（或平板划线）法将微生物接种到该培养基表面，比较透明圈的大小。

（3）牛奶中蛋白质被蛋白酶水解后，会形成以蛋白酶产生菌为中心的无色透明圈，且蛋白酶高产菌株水解蛋白质能力更强，透明圈会更大。因此挑选无色透明圈大的菌落即可挑选出蛋白酶高产菌株。

（4）凝胶色谱(凝胶层析)是一种液体柱色谱。利用这种方法，
可根据样品中各种物质分子量大小的不同，
将样品通过多孔胶床来达到分离的目的。故根据相对分子质量的大小纯化发酵后获得的蛋白酶的有效方法是凝胶色谱法（或者分配色谱法）。

（5）碱性蛋白酶在加酶洗衣粉中应用最广泛、效果最明显。