利用PCR技术扩增目的基因是目的基因获取的常用方法之一。现有目的基因“X基因”，它是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示。
（1）获取目的基因是实施基因工程的第一步，基因工程的核心步骤是 ，基因工程的原理是 。目的基因的获取除利用PCR技术扩增外，还可以从基因文库中获取。基因文库包含____和____等类型，前者的基因中含有启动子。。
（2）PCR的原理是____。PCR扩增的过程一般是：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的____，该过程在细胞内也可利用____酶实现。复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠 完成。在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是
。
（3）至少需要循环一～轮，图2所示的五种不同的DNA分子在产物中才都会出现。经4轮循环后，图中④、⑤所示的DNA分子数分别占DNA分子总数的比例为 和 。
科目：高中生物 来源：2011-2012学年福建省上杭一中高二下学期期末考试生物试卷（带解析） 题型：综合题
T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。
环状DNA示意图
A、B、C、D表示能与相应T—DNA链
互补、长度相等的单链DNA片段；
箭头指示DNA合成方向。
（1）为筛选出已转化的个体，需将T1代播种在含 的培养基上生长，成熟后目交，收获种子（称为T2代）。
（2）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T2代播种在含 的培养基上，获得所需个体。
（3）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与 植株进行杂交，再自交 代后统计性状分离比。
（4）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性 。
（5）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。
其过程是：提取 植株的DNA，用限制酶处理后，再用 将获得的DNA片段连接成环（如下图）。以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取 作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。
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科目：高中生物 来源：2013届福建省高二下学期期末考试生物试卷（解析版） 题型：综合题
T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。
环状DNA示意图
A、B、C、D表示能与相应T—DNA链
互补、长度相等的单链DNA片段；
箭头指示DNA合成方向。
（1）为筛选出已转化的个体，需将T1代播种在含 的培养基上生长，成熟后目交，收获种子（称为T2代）。
（2）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T2代播种在含 的培养基上，获得所需个体。
（3）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与 植株进行杂交，再自交 代后统计性状分离比。
（4）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性 。
（5）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。
其过程是：提取 植株的DNA，用限制酶处理后，再用 将获得的DNA片段连接成环（如下图）。以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取 作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。
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