Question

【题目】神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。本研究将为NRP-1单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。

（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用__________技术获得MCF7细胞用于后续实验。用重组的人_________蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，制备杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取培养孔中的__________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用__________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得NRP-1单克隆抗体（NRP-1 MAb）。

（2）提取正常组织细胞和MCF7细胞的总蛋白，设置空白对照，加入NRP-1 MAb进行蛋白质免疫印迹，实验结果如下：

该实验结果说明了__________。

（3）将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的体积，如下图所示：

对照组注射__________，从上图中可以看出__________。

（4）结合题干信息，综合以上研究请你推测NRP-1 MAb抑制肿瘤的作用机理是__________。

（5）注射不同剂量NRP-1 MAb 33天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图：

从该结果中可以看出____。综合比较（3）和（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂量的NRP-1 MAb在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。

（6）基于以上研究，科学家们对该抗体的用药方式有两种观点：谨慎用药和适宜浓度用药。你支持哪个观点，并说出理由______。

Answer 1

【答案】动物细胞培养技术 神经纤毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 抗原—抗体杂交技术 NRP-1在MCF7细胞中高表达 等量的生理盐水 NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的效果更显著 NRP-1在MCF7细胞中高表达，NRP-1 MAb与NRP-1特异性结合，阻断了血管内皮生长因子与NRP-1的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。 NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤组织的重量，中、高剂量抗体的降低效果稍微没有低浓度的好，不同剂量降低效果的差异并不显著。 支持谨慎用药理由：随着治疗时间的延长，这种不一致性可能会加大，应进行后续研究，现阶段谨慎用药。支持适宜浓度用药理由：该抗体已经显示了显著的抑瘤效果，这种不一致性很小，可以考虑适宜浓度用药

【解析】

动物细胞融合，又称细胞杂交，指将两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。

单克隆抗体制备的过程中需要经过两次筛选，第一次用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次用专一抗体检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。

（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶进行分散处理后，运用动物细胞培养技术获得MCF7细胞。要制备NRP-1单克隆抗体，需要用重组的人NRP-1蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，产生相应的浆细胞，与该浆细胞与骨髓瘤细胞进行融合处理，制备杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，可以从培养液即上清液中提取到单克隆抗体，可以用抗原-抗体杂交技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得NRP-1单克隆抗体（NRP-1 MAb）。

（2）根据实验结果可知，只有MCF7细胞中蛋白可以与NRP-1 MAb发生免疫反应，说明NRP-1在MCF7细胞中高表达。

（3）实验的自变量是给药的剂量和时间，因变量是肿瘤的体积，对照组应该注射等量的生理盐水，根据实验结果可知，NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤的体积，中、高剂量抗体的降低效果比低剂量的效果更显著。

（4）根据“神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成”及实验数据NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤的体积可知，NRP-1在MCF7细胞中高表达，NRP-1 MAb与NRP-1特异性结合，阻断了血管内皮生长因子与NRP-1的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。

（5）注射不同剂量NRP-1 MAb 33天后，剥离肿瘤组织称重，根据实验数据可知，NRP-1 MAb能够有效地降低肿瘤组织的重量，中、高剂量抗体的降低效果稍微没有低浓度的好，不同剂量降低效果的差异并不显著。

（6）综合比较（3）和（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂量的NRP-1 MAb在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。根据上述研究结果可知，随着治疗时间的延长，这种不一致性可能会加大，应进行后续研究，故现阶段应该支持谨慎用药。