日本的下村修、美国的沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。请据图回答相关问题：
（1）图中形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。如果限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶和上述两种不同限制酶的作用下，能否将质粒和目的基因连接起来________理由是________。
（2）在②过程进行转基因体细胞的筛选时，比较简易的筛选方法是通过设备检测，发出绿色荧光的细胞即为转基因体细胞。绿色荧光蛋白在转基因体细胞的________中合成，写出这一过程包含的信息传递图解：________。
（3）在③过程培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和________等。
（4）在核移植过程中，供体细胞一般选用传代到________代以内的转基因体细胞，原因是________。乙兔提供的细胞应是________。
（5）钱永健通过改变氨基酸排序，造出能吸收、发出不同颜色光的荧光蛋白，并能让它们发光更久、更强烈。对荧光蛋白的改造属于________工程。
科目：高中生物 来源：2011-2012学年广东省连州市连州中学高二下学期期中考试生物试卷（带解析） 题型：综合题
日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：
(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在 的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到 酶。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)
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科目：高中生物 来源：2013届广东省连州市高二下学期期中考试生物试卷（解析版） 题型：综合题
日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：
(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在 的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到 酶。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)
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科目：高中生物 来源： 题型：
日本的下修村、美国的沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有广阔的应用前景。请据下图回答相关问题：
（1）①过程除了用“鸟枪法”直接提取外，还可以用 得到目的基因。③过程通常用的方法是 。
（2）将绿色荧光蛋白基因导入受体细胞需要运载体的帮助。选取质粒作为运载体的原因除了具有1至多个的限制酶切点、具有某些标记基因外，还因为 。
（3）经过④过程后，有的细胞可能导入了重组载体，简单的鉴定方法是利用 就可以把它们筛选出来。
（4）GFP发出的荧光稳定，检测方便而且对细胞也不会产生明显毒害，因此在基因工程中可以作为 ，用以追踪多种生物细胞的迁移和变化情况。
（5）在核移植过程中，供体细胞一般用传到 代以内的转基因体细胞作为受体细胞。
（6）在⑤过程培养重组细胞时，必须模拟细胞在体内生存的良好环境和物质代谢过程，为其提供必须韵营养物质、适宜的酸碱度、渗透压、温度、二氧化碳以及严格 条件。胚胎移植的最佳时期是 。
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科目：高中生物 来源： 题型：
日本的下村修、美国的沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。请据图回答相关问题：
(1)图中形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。如果限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶和上述两种不同限制酶的作用下，能否将质粒和目的基因连接起来？理由是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)在②过程进行转基因体细胞的筛选时，比较简易的筛选方法是通过设备检测，发出绿色荧光的细胞即为转基因体细胞。绿色荧光蛋白在转基因体细胞的________中合成，写出这一过程包含的信息传递图解：________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)在③过程培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和________等。
(4)在核移植过程中，供体细胞一般选用传代到________代以内的转基因体细胞，原因是________________________________________________________________________。乙兔提供的细胞应是________________________________________________________________________。
(5)钱永健通过改变氨基酸排序，造出能吸收、发出不同颜色光的荧光蛋白，并能让它们发光更久、更强烈。对荧光蛋白的改造属于________工程。
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