[题目]研究人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草.该过程所用的质粒与含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图1.图2所示.限制性核酸内切酶BamHI.BclⅠ.Sau3AⅠ.HindⅢ.它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC.T↓GATCA.↓GATC.A↓AGCTT.图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图.请回� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】研究人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草，该过程所用的质粒与含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示。限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图。请回答下列问题。

（1）图1质粒中没有标注出来的基本结构是。

（2）用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时，应选用限制酶切割质粒，选用限制酶切割含目的基因的DNA片段。限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键。

（3）将上述切开的质粒与目的基因混合，加入DNA连接酶连接后，导入受体受体细胞，受体细胞的类型（对两种抗生素表现出抗性R或敏感性S）包含（不考虑基因突变）。

①XR、YR ②XR、YS ③XS、YR ④XS、YS

（4）将图3过程（填序号）中发生了基因重组，过程②、③所用的培养基中，通常要调控好两类激素的比例。

（5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是。

【答案】（8分）（1）复制原点（2）BamHI Sau3AI（或BamHI、Sau3AI）磷酸二酯

（3）①②④（4）①生长素和细胞分裂素

（5）用一定浓度盐水浇灌转基因幼苗或将其移栽到盐碱地中观察其生长状态

【解析】（1）图中质粒的结构中有启动子、标记基因、终止子，没有复制原点。

（2）由于目的基因要表达的话，必须插入启动子与终止子之间，所以不能用BclⅠ进行切割。又因为BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ三种限制酶切割漏出来的粘性末端是相同的，所以应该用BamHI切割质粒，用BamHI、Sau3AI切割目的基因。限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。

（3）将上述切开的质粒与目的基因混合，加入DNA连接酶连接后，导入受体受体细胞的可能有重组质粒或质粒，重组质粒含有X抗生素抗性基因，所以受体细胞可能抗X而对Y敏感，②正确；也可能抗X和抗R，①正确；如果质粒中经过BamHI和Sau3AI切割后X被切掉的话，则重组质粒不含两种抗性基因，所以受体细胞可能两种抗性都没有，④正确。

（4）图3中①过程通过农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，实现了不同生物的基因重新组合。过程②、③表示是植物组织培养过程，该过程中需要调控好生长素和细胞分裂素的比例。

（5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是用一定浓度盐水浇灌转基因幼苗或将其移栽到盐碱地中观察其生长状态。

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