Question

17．表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题：

限制酶序号	①	②	③	④	⑤	⑥
限制酶	AluⅠ	BamHⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	BglⅡ	HindⅢ
识别序列及切割位点

（1）分析表中6种限制酶识别的序列特点，其不同点是：不同酶识别的序列不同，共同点是：每一序列的双链反向阅读碱基序列相同（回文序列）．
（2）限制酶②和⑤的切割后产生的黏性末端是一样的．（填限制酶的序号）
（3）在用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，不能使用EcoR I切割的原因是EcoRI会破坏质粒中的四环素抗性基因结构．
（4）如果用限制酶HindⅢ与BamHI和DNA连接酶将图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，则此过程可获得2种环状DNA．（只考虑质粒和目的基因之间的连接）
（5）图2中的外源DNA用限制酶②和⑥同时切割，能产生3种DNA片段．
（6）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的复制．
（7）如果要初步筛选出导入上述重组质粒的某种细菌，则应该在培养基中加入适量四环素．

Answer 1

分析 分析图1：外源DNA上含有AluⅠ、BamHⅠ、BglⅡ、EcoR I和HindⅢ五种限制酶的识别序列和切割位点，其中AluⅠ的切割序列位于目的基因上．
分析图2：质粒上BamHⅠ、BamHⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中EcoRⅠ的切割位点位于四环素抗性基因上．

解答 解：（1）分析表中6种限制酶识别的序列特点，其不同点是：不同酶识别的序列不同，共同点是：每一序列的双链反向阅读碱基序列相同（回文序列）．
（2）表中限制酶②和⑤的切割后产生的黏性末端是一样的，都是CTAG-．
（3）质粒中，EcoRⅠ的切割位点位于四环素抗性基因上，若用该限制酶切割会破坏该标记基因，因此在用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，不能使用EcoR I切割．
（4）如果用限制酶HindⅢ与BamHI和DNA连接酶将图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，若只考虑质粒和目的基因之间的连接，则此过程可获得2种环状DNA，一种是含有抗性基因的环状DNA，另一种是不含抗性基因的环状DNA．
（5）图2中的外源DNA含有一个限制酶②的切割位点，也含有一个限制酶⑥的切割位点，因此用限制酶②和⑥同时切割，能产生3种DNA片段．
（6）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的复制．
（7）由图可知抗性基因是四环素标记基因，因此如果要初步筛选出导入上述重组质粒的某种细菌，则应该在培养基中加入适量四环素．
故答案为：
（1）不同酶识别的序列不同  每一序列的双链反向阅读碱基序列相同（回文序列）
（2）②⑤
（3）EcoRI会破坏质粒中的四环素抗性基因结构
（4）2  
（5）3  
（6）复制  
（7）四环素

点评 本题结合基因结构图和运载体结构图，考查基因工程的技术和原理，重点是限制酶和DNA连接酶，要求考生认真分析图1和图2，能根据图中和表中信息选择合适的限制酶，准确判断使用DNA连接酶连接的结果，再运用所学的知识答题．